甲型h1n1流感病毒非结构蛋白ns1及人cpsf30结合拮抗剂筛选模型的建立及其药物筛选.pdfVIP

388 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (3) : 388394 甲型H1N1 流感病毒非结构蛋白NS1 与人CPSF30 结合 拮抗剂筛选模型的建立及药物筛选 孔建强, 沈君豪, 黄 勇, 阮仁余, 项 斌, 郑晓东, 程克棣, 王 伟* ( 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 卫生部天然药物生物合成重点实验室、 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室, 北京 100050) 摘要: 利用酵母双杂交技术研究甲型H 1N1 流感病毒非结构蛋白NS1 和人切割与多聚腺苷酸化特异因子30 kDa 亚基 (CPSF30) 的相互作用, 构建了一个酵母模型用于筛选NS1 和 CPSF30 相互作用的拮抗剂, 从而为筛 选抗甲型 H 1N1 流感病毒药物奠定基础。采用连 重叠 PCR 技术克隆得到 H 1N1 流感病毒NS1 基因。提取人 HeLa 细胞RNA, 通过RT-PCR 克隆得到人CPSF30 基因。将NS1 基因克隆到表达载体pGBKT7 中获得诱饵载体 pGBKNS1, 将CPSF30 基因克隆到载体pGADT7 中获得捕获载体pGADCPSF; 将pGBKNS1 和pGADCPSF 共转 入酿酒酵母AH 109, 获得重组酿酒酵母AH 109[pGADCPSF+pGBKNS1]。利用该模型筛选了30 余种中成药, 发 现双黄连口服液等4 种中成药能抑制N S1 和CPSF30 之间的相互作用。 关键词: H 1N1 流感病毒; 非结构蛋白NS1; CPSF30; 酵母模型; 中药筛选 中图分类号: R963 文献标识码:A 文章编号: 05 13-4870 (2010) 03-0388-07 Development of a yeast two-hybrid screen for selection of A/H1N1 influenza NS1 non-structural protein and human CPSF30 protein interaction inhibitors KONG Jian-qiang, SHEN Jun-hao, HUANG Yong, RUAN Ren-yu, XIANG Bin, ZHENG Xiao-dong, * CHENG Ke-di, WANG Wei (Institute of Materia Medica, Chinese Academy of M edical Sciences Peking Union M edical College, Key Laboratory of B iosy nthesis of Natural Products, M inistry of Health of PR C Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine, M inistry of Health of PR C, Beij ing 100050, China) Abstract: Influenza A/H1N 1 vi