MMP-9的表达变化和脊髓空洞前状态的关系.pdfVIP

中文摘要 MMP-9的表达变化与脊髓空洞前状态的关系 摘 要 目的：脊髓空洞症是缓慢进展的退行性疾病，迄今为止 对其形成机理尚不完全清楚。脊髓空洞前状态是近几年在研 究脊髓空洞症发病机制中提出的一个新的概念，由于它反映 了脊髓空洞症发病的早期表现，而且可以被逆转，所以对脊 髓空洞症的预防和治疗具有重要意义。 我们先前实验显示，脊髓空洞前状态的病理变化主要为 缺血水肿样改变。这种水肿为血管源性水肿，主要与血管内 皮通透性增加和血脑脊液脊髓屏障的损害有关。基质金属蛋 9，MMP．9)可以降解Ⅳ型， 白酶．9(matrixmetalloproteinase V型胶原，纤维连接蛋白，弹性蛋白和变性后的基质胶原， 内皮细胞间的紧密连接以及构成血脑脊液脊髓屏障的主要 成分基质层，故它可以破坏血管内皮和血脑脊液脊髓屏障使 二者通透性增加，造成血管源性水肿。本实验拟通过观察家 兔脊髓空洞症模型的空洞形成前期脊髓的组织学变化，测定 脊髓含水量，应用westernblot和免疫组织化学方法对 旨在探讨MMP．9在脊髓空洞前状态形成中的作用，为临床 防治脊髓空洞症提供理论依据。 方法：将96只健康、体重1．5-2kg的中国白兔，随机分 生理盐水组30只和正常对照组6只。家兔在氯胺酮 中文摘要 麻醉后，取俯卧颏低位，，颈项部手术区常规消毒，按 McLaurin法，用4号针头行经皮枕大池穿刺术，缓慢抽出 O．6ml；依同样方法生理盐水组仅注入37℃生理盐水O．6ml。 Doxycycline组动物给予Doxycycline25mg／kg．d胃管内注 入。正常对照组麻醉后处死。在第1、3、7、lO、14天，各 组各6只，处死后采集颈髓组织标本。各组动物分别在不同 时间分批用氯胺酮50mg／kg快速推注，断头处死。将动物脑 和颈髓组织迅速取出，于C。．：节段截取4mm，仔细剔除表 面蛛网膜及Kaolin沉积，滤纸吸除表面水分，立即应用于 脊髓含水量的测定，置电子天平(分度值0．00019)称取湿 重(w)，再经110℃恒温烤箱烘烤24小时后称取干重(D)， 应用公式：脊髓含水量(％声(W—D)／W×100，计算出脊 髓含水量；截取C2．3节段标本置4％多聚甲醛固定48小时后， 常规脱水，石蜡包埋，制作5um厚连续切片。进行HE 染色和免疫组织化学染色观察组织病变程度及MMP．9表达 水平；截取C，．4节段标本迅速放入液氮中2分钟，．70℃冰 箱保存，应用Western 1 分析应用SPSS0．0软件包进行方差分析检验比较各kaolin 活性的差异，数据以均数±标准差表示。 结果：术后第1-3天，Kaolin组动物表现出精神萎靡， 嗜睡，厌食；于7．14天症状逐渐加重，且出现肢体无力，轻 瘫及运动协调性差等神经功能障碍，并伴有明显消瘦，其中 中文摘要 1只因处于濒死状态而处死。生理盐水组和正常对照组动物 在观察期间则表现正常。Doxycycline组动物也有精神萎靡， 嗜睡，厌食等表现但仅有8只出现肢体无力和轻瘫。应用干 湿法测定观察，生理盐水组各时间点测定的脊髓含水量和正 常对照组家兔相比均无明显统计学差异；Kaolin组各时间点 动物脊髓含水量与生理盐水组各时间点和正常对照组比较有 kaolin组比较有明显降低。肉眼观察生理盐水组和正常对照 组动物脑、脊髓、蛛网膜、蛛网膜下腔、中央管外观正常。 Kaolin组动物的脑脊髓标本在第l天肉眼观察变化不明显， 仅于下位脑干至上颈髓背、腹侧蛛网膜下腔可见大量Kaolin 沉积，四脑室正中孔和侧孔被1：同程度阻塞；第3天除上述 变化外，开始出现脑组织肿胀、脊髓肿胀增粗；第7、lO、 14天水肿最为明显，枕大池狭窄或闭塞，四脑室轻度扩张， Kaolin肉芽肿形成，与蛛网膜卜．腔和脊髓粘连，不易剥离。 只见下位脑干至上颈髓背、腹侧蛛网膜下腔有大量Kaolin沉 积，四脑室正中孔和侧孔被不同程度阻塞；第10、14天脊髓 肉芽肿形成，与网膜下腔和脊髓粘连，不易剥离。光镜观察 生理盐水组和正常对照组动物脊髓神经元轮廓正常，核及核 仁清楚，胞浆内尼氏体分布均匀，神经元、神经胶质细胞、 血管周围