第七_花药和花粉培养.ppt

培养方式 液体培养：液体悬浮，或添加有利花粉胚悬浮的基质（如30%ficoll) 双层培养：固体-液体双层培养 花药花粉分步培养： 条件培养：利用预先培养过花药的液体培养基进行 花药培养，可使花药培养的效率大大提高 。  1）胚状体发育途径：小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。 4、花粉植株的形态发生 烟草花药培养——通过胚状体途径再生形成小植株  1）胚状体发育途径：小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。 2）愈伤组织发育途径：小孢子分裂数次形成愈伤，再分化形成花粉植株。此途径产生的植株会出现变异且倍性复杂。 2）、花粉植株的形态发生方式 5、单倍体植株鉴定和染色体加倍 单倍体植株的鉴定 1）形态学鉴定 2）染色体分析 单倍体植株的二倍化：0.02-0.4%的秋水仙素 * 小孢子母细胞经减数分裂产生4个一群的单倍体细胞，这个发育时期称为四分体（tetrad）。 * 由四分体刚刚解体成单细胞这一阶段的单倍体细胞称为小孢子。小孢子继续发育，其核进行第一次分裂后形成1个精核（generative nucleus）和1个营养核(vegetative nucleus)的二核细胞；营养核再分裂一次形成2个精核和1个营养核的三核细胞。我们把这种二核或三核细胞称为花粉。在花粉培养过程中，通常是取花粉发育处于单核靠边期和双核早期阶段的花粉细胞进行培养。 * 可以避免花药壁、花丝和药隔等体细胞组织的干扰，具有单细胞、单倍性和较高同步性等特点 * 花药供体植株的生长条件对花药培养反应听影响委大。水稻、小麦、大麦等主茎穗诱导率明显高于分蘖穗花药愈伤组织的诱导率。 * 由四分体刚刚解体成单细胞这一阶段的单倍体细胞称为小孢子。小孢子继续发育，其核进行第一次分裂后形成1个精核（generative nucleus）和1个营养核(vegetative nucleus)的二核细胞；营养核再分裂一次形成2个精核和1个营养核的三核细胞。我们把这种二核或三核细胞称为花粉。在花粉培养过程中，通常是取花粉发育处于单核靠边期和双核早期阶段的花粉细胞进行培养。 * 培养基是花药培养中影响花粉启动和再分化的重要条件，培养基成分是否合适往往是决定花药培养成功的关键因素，而且还影响发育的方式。 激素，在此花药的诱导脱分时，需要有较适宜的细胞分裂素和生长素配比，从而有效地诱导花粉细胞启动分裂，同时又控制二倍体细胞的分裂。高浓度的2，4-D主要诱导花药形成愈伤组织，而不能形成胚状体，从而增加了二倍体细胞发育的机会。 包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 * 植株形态学鉴定法： 单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头长，花粉粒小，不结实。 色体直接计数法： 通常取根尖、茎尖等分生组织区进行制片，直接计数染色体数目。 加倍方法： 1、秋水仙素诱导 （1）浸泡法 无菌条件下以一定浓度的秋水仙素浸泡再生小植株，再转移至新鲜培养基中培养。 （2）生长锥处理 秋水仙素水溶液直接涂抹生长点（顶芽或腋芽）。 （3）培养基处理 将单倍体植株和任何一部分作为外植体，种植在附加一定浓度和秋水仙素的培养基中培养一段时间后，转入无秋水仙素的相同培养基中继续培养诱导胚状体。 第七章 花药和花粉培养 一、 概述 （一）概念 花药培养:把发育到一定阶段的花药接种在人工培养基上,使其中的花粉发育成单倍体植株的过程. 花粉培养(小孢子培养):从花药中分离出花粉粒,使之成为分散的或游离状态,通过培养使花粉粒脱分化,进而发育成完整植株的过程. 花药培养和花粉培养是获 得植物单倍体的有效方法之一 二倍体(diploid )植物其单倍体（haploid）即一倍体（monoploid ）如， 玉米 2n = 2x = 20 n= x = 10； 水稻 2n = 2x = 24 n= x = 12 四倍体(tetraploid)植物其haploid为dihaploid 如，马铃薯 2n = 4x = 48， n = 2x = 24 六倍体(hexaploid)植物其haploid为triploid 如，普通小麦2n = 6x = 42， n = 3x = 21 八倍体(octoploid)植物其haploid为tetraploid 如，草莓 2n = 8x = 56 ，n = 4x = 28 单倍体(haploid)——指具有配子染色体数的植物个体. 体细胞染色体数减半； 单倍体植物与二倍体相比较，有三个明显的特点： 生长发育弱，体形小、各器官明