第十八章氨基酸、多肽、蛋白质和核酸(第三版)详解.pptVIP

Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.2.2 N-端氨基酸的测定 Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。 在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。 末端基氨基酸测定 ? 二硝基氟苯（DNFB）法 Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-氨基酸。 此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。 末端基氨基酸测定 ? 丹磺酰氯法 Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.2.3 Edman 降解 Edman氨基酸顺序分析法 Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.2.4 C-端氨基酸的测定 羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解。根基不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。 目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。 羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。 羧肽酶法 Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.2.5 多肽的选择水解 SangerＦ及其他工作者花了约10年时间于己于1953年首先测定出牛胰岛素的氨基酸顺序,于己于1958年获得诺贝尔化学奖. Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.3 多肽和蛋白质的合成 天冬氨酸 + 苯丙氨酸 天冬-天冬 +苯丙-苯丙 + 天冬-苯丙 +苯丙-天冬 -H2O 所以要进行保护某官能团. 18.2.3.1 氨基的保护 N-苄氧羰基氨基酸 Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 苯丙氨酰甘氨酸乙酯 100% Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.3.2 羧基的保护 羧基的保护方法是转变为酯. 18.2.3.3 肽键的生成 N,N,-二环己基碳二亚胺(DCCI或DCC) Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 1965年我国化学家首先合成了具有生理活性的结晶牛胰岛素.1971年又完成了猪胰岛素晶体结构的测定,牛胰岛素和猪胰岛素都是51肽. Organic Chemistry Xumiaoqing Organic Chemistry Xumiaoqing 18.2.3.4 多肽的固相合成 见P474-475 1984年Merrifield获得诺贝尔