临床检验基础要点.docVIP

血液标本采集和血涂片的制作 1、皮肤采血的法的采血方法 （1）轻轻按摩采血部位（左手无名指指腹内侧或耳垂）使局部自然充血。 （2）消毒皮肤，待其干燥后紧捏采血部位两侧 （3）右手持一次性消毒采血针迅速刺入（深度以2到3cm为宜），第一滴血因混入组织液，一般将其弃之不用。或根据检测项目决定是否 （4）采血结束后用无菌干棉签压住采血部位以止血。 2、负压采血法的的优点：有效保护有效成分，剂量准确，传送方便，封闭无尘，标识醒目，刻度清晰，容易保存，一次进针多管采血等 3、常用添加剂的用途与特点 ①乙二胺四乙酸盐【EDTA】： 作用：与血液中Ga2+结合形成螯合物凝血过程中断与血液中Ga2+结合。 用途：全血细胞计数。离心法HCT的测定。 注意事项：抗凝剂用量和血液的比例，采血后必须立即混匀。 ②枸橼酸钠： 作用：与血液中Ga2+结合 用途：血沉，凝血实验，血液保养液。 注意事项：抗凝能力较弱，抗凝剂浓度，体积和血液的比例非常重要 ③肝素 作用：加强抗凝酶灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶形成。 用途：可用于血浆的生化，免疫项目，如血气分析，肝素锂适用于红细胞渗透脆性试验 注意事项：电极法测血钾与血清结果有差异；不适宜血常规检查。 ④草酸盐 作用：草酸盐与血液中中Ga2+形成草酸钙沉淀 用途：草酸钾干粉常用于血浆标本抗凝 注意事项：容易造成钾离子污染其他检测项目，现用的少。 4、血涂片的染色； Wright染色的染色原理：物理吸附和化学亲和作用 5、不同PH对血细胞染色结果的影响 ①PHPI 导致蛋白质所带正电荷增多，易与伊红结合。染色结果偏红 ②PHPI 导致蛋白质所带负电荷增多，易与亚甲蓝或天青结合，染色结果偏蓝 6、Wright染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇形成。 其中甲醇的作用为： ①溶解伊红和亚甲蓝 ②具有很强的脱水作用，可以固定红细胞形态，提高对染料的吸附作用。增强染色效果。 7、血涂片染色的方法学评价 ①Wright染色：最常见的染色法，尤其对于胞质成分及中性颗粒等染色，可获得满意的染色效果，但对胞核的染色不如Giemsa染色。 ②Giemsa染色：对胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差 ③Wright-Giemsa染色：广泛使用的方法，所使用的缓冲液与Wright染色法相同，该对血细胞胞核，胞质和胞质内颗粒均着色鲜明。 第二章 血液一般检查 1、红细胞计数的方法有显微镜法和血液分析仪法 2、红细胞计数的检测原理： 显微镜法的检测原理：采用等渗稀释法将血液标本稀释一定倍数（200倍），冲入牛鲍血细胞计数板中，在显微镜下计数一定区域（体积）内的红细胞数量，经换算求出每升血液中红细胞数量。 【 N=5个中方格/HP】RBC/L=N×(25/5)×10×106 ×201 =N×1012 报告方式 X.XX×1012 3、血红蛋白【Hb】 4、检测原理以及方法学评价 检测原理： 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定检测原理，血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子被高铁氰化钾氧化为高铁离子，血红蛋白转化成高铁血红蛋白【Hi】，Hi与氰化钾中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm。在特定条件下，HiCN mmol 消光系数为44/(mmol·cm)。 方法学评价： 常用的比色法有：①氰化高铁血红蛋白【HiCN】，（HiCN测定法是WHO和ICSH推荐的参考方法，）十二万基硫酸钠血红蛋白测定法【SDS-Hb】碱羟血红蛋白【AHD575】测定法，叠氮高铁血红蛋白【HiN3】测定法，溴化十六烷基三甲胺【CTAB】等。 方法学评价： ①：HiCN测定法： 优点：参考方法，操作简单，反应速度快，可检测除SHb之外的所有Hb，产物稳定，便于质控。 缺点：KCN有剧毒，可是高白细胞高球蛋白血症的标本浑浊，对HbCO的反应慢，不能测定HbS。 ②SDS-Hb 优点：次选方法，操作简单，呈色稳定，试剂无毒，结果准确，重复性好。 缺点：SDS质量差异大，消光系数未定，SDS溶血活力大，易破坏白细胞，不适用于同时进行白细胞计数的血细胞分析仪。 ③AHD575 优点：试剂简易，无毒，呈色稳定，准确性与精密度较高 缺点：575nm波长比色，不便于自动检测，HbF不能转化，氰化血红素纯度不够。 ④HiCN测定法 优点：准确性精密度较高 缺点：试剂仍有毒性（为HiCN的1/7）、HbCO转化慢（20分钟) 5、异常红细胞异常的机制及临床意义 小红细胞 直径6μm 可能机制：①中央染色过浅；Hb合成障碍；②淡染色区消失（球形红细胞） 临床意义：缺铁性贫血，珠蛋白生成障碍性贫血，遗传性球形红细胞增多症 大红细胞 直径10μm 中央染色深 可能机制：①早期脱核的年轻RBC②叶酸及维生素B12缺乏③胞膜胆固醇/磷脂