-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 尿素分子的立体结构 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 NH3 +H2O 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 （一）筛选菌株 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) ——耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌 在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 1、实验室微生物的筛选原理（P21） 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 （一）筛选菌株 2、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 （一）筛选菌株 1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源是葡萄糖，氮源是尿素 2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？ 有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 阅读22页本课题使用的培养基配方 （二）微生物计数 1、显微镜直接计数法 1mm 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　 1mm 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少? 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　　 5AB×104 5A 缺点： 不能区分死菌与活菌 1、显微镜直接计数： 利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 2、滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 （二）微生物计数 3、统计菌落数目——稀释涂布平板法 酵母菌的菌落特征：菌落形态特征与细菌相似，但比细菌大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，多数不透明 ，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落颜色单调，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。 （二）微生物计数 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 ③为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ④统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数； 3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。 菌落数统计表格（取样0.1mL,稀释倍数106） 第1组 第2组 第3组 第4组 1 2 3 4 5 6 平均 每mL样品中活菌数 平板 组别 恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。 思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。 C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 M：稀释倍数 思考2：统计的菌落数往往比活菌的际数目高还是低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？ 实例分析1 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学