红细胞免疫功能及其测定方法.ppt

红细胞免疫功能及其测定方法 汇报人：王 翀 1 红细胞与其它免疫反应细胞的比较 红细胞与其它血细胞均来源于骨髓造血干细胞。以往认为虽然它们来源相同，但功能各异，前者主要是运输气体，而后者则参与免疫和防御机制。目前研究表明，红细胞不仅具有呼吸功能，且同白细胞一样具有免疫功能。 2 红细胞的免疫功能 2.1 增强吞噬作用 纳尔逊(Nelson)用肺炎球菌和梅毒螺旋体等进行体外实验，发现被相应抗体致敏的肺炎球菌或梅毒螺旋体，只有在含补体、红细胞及白细胞的混合物中，80％～95％能迅速被吞噬而从液相中消失；若缺少红细胞，则在较长时间内仅有少数被吞噬。1956年Nelson又将抗体调理过的肺炎球菌注入猴体内，获得的结果与体外实验相同，100％的肺炎球菌粘附于红细胞。 2.2 红细胞的免疫粘附作用 免疫粘附是指抗原-抗体复合物与补体C3b结合后，可粘附于灵长目或非灵长目的红细胞与血小板上，这一现象统称为“血细胞免疫粘附作用”。红细胞的免疫粘附活性是通过I型补体受体（complement receptor type I，CR1 )为基础实现的。血循环中免疫复合物( IC )的清除主要由红细胞CR1携带至肝脾网状内皮系统交给巨噬细胞消灭。CR1成簇分布，人类每个红细胞大约表达200～500个CR1分子，主要配体为C3b。该受体为糖蛋白，分子量为205 ，000。红细胞上的C3b受体占血循环中C3b受体总数的95％以上。因此，血循环中的抗原-抗体复合物遇到红细胞比遇到白细胞的机会多500～1 000倍。 2.3 防御感染 红细胞与细菌、病毒等微生物免疫粘附后，不仅可以通过过氧化物酶对它们产生直接的杀伤作用，而且还可以促进吞噬细胞对它们的吞噬作用。因此，红细胞的免疫功能可以看作是机体抗感染免疫的因素之一。 小结：目前已知红细胞具有以下免疫功能：(1)识别携带抗原；(2)清除循环中免疫复合物；(3)增强T细胞依赖反应；(4)效应细胞样作用；(5)促进吞噬作用。而这些免疫功能的生理学基础即为红细胞免疫粘附作用。 3 红细胞免疫功能异常与疾病 近年研究证实在某些病理状态下，红细胞的免疫粘附活性可发生改变。Siegel等检查了23名宫颈癌、胃癌和直肠癌患者的红细胞免疫粘附功能，发现这些患者的红细胞粘附抗原-抗体-补体复合物的能力较正常人显著降低。这一资料提示在肿瘤的发展过程中，除可抑制白细胞免疫功能外，还可抑制红细胞的免疫功能。 系统性红斑性狼疮（SLE）、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病，是因为患者体内针对自身组织发生免疫反应所致。一般认为，自身免疫病患者的细胞免疫和/或体液免疫功能处于相对增强状态。通过对此类病人红细胞免疫系统的研究结果表明，其免疫功能亦明显增强，且与白细胞免疫系统的功能改变相平行，这可能与自身免疫病患者血清中存在着红细胞C3b受体活性抑制因子有关。 4 红细胞免疫功能的检测及其临床意义 4.1 红细胞C3b受体的测定 原理：红细胞膜上的C3b受体(CR1)可与补体致敏的酵母菌粘附形成花环( RBC-C3bR花环 )；同时红细胞膜上粘附的IC中C3b分子或抗原补体复合物中的C3b分子可与未致敏的酵母菌的酵母多糖粘附形成花环（ RBC-IC花环 ）。 4.2 红细胞CR1数量的测定 4.2.1 红细胞CR1密度相关基因多态性测定方法 DNA提取 ? PCR扩增 ? 限制性片段长度多态性酶切分析（RFLP分析） ? 琼脂糖凝胶电泳 4.2.2 红细胞CR1流式细胞仪测定方法 原理：单个红细胞CR1数量比白细胞CR1低，为了提高试验的敏感度，采用间接免疫荧光染色法流式细胞仪检测技术。用鼠抗人红细胞CR1单抗与一定量待测纯红细胞数反应洗涤，再加羊抗鼠IgG荧光标记抗体反应洗涤后，上流式细胞仪测定，算出荧光染色红细胞平均强度，为红细胞CR1数量指标。 5 正常红细胞与异常红细胞毛细管电泳分离 能直接反映颗粒电性质的毛细管电泳具有高效、简便、灵敏度高、样品消耗少等优点，在生化领域已经广泛应用于蛋白质及其衍生物、肽类、氨基酸、糖类物质、无机离子、手性物质等的分离与分析。 运用毛细管电泳