03 实验三 产中性蛋白酶芽孢杆菌的发酵复筛.pptVIP

微生物学实验技术 一株产中性蛋白酶芽孢细菌的选育研究 山东农业大学生命科学学院 微生物学系 2013.09 实验内容 一、产中性蛋白酶芽孢细菌的初步筛选 二、产中性蛋白酶芽孢细菌的诱变育种 三、产中性蛋白酶芽孢细菌的发酵复筛 四、产中性蛋白酶芽孢细菌的分类鉴定 五、产酶菌株生长曲线的测定 六、产酶菌株的菌种保藏 实验三 产中性蛋白酶芽孢菌的发酵复筛 一、目的意义 二、材料方法 三、数据结果 四、讨论分析 五、参考文献 一、目的意义 通过液体发酵法产生中性蛋白酶，采用Folin-酚法测定其产酶活性，从初筛及诱变所得的菌株中获得一株高产中性蛋白酶的菌株。 关键技术: 标准曲线的制作 液体发酵产酶 Folin-酚法测定中性蛋白酶活性 二、材料方法 技术路线： 出发菌株（纯化） 突变株分离 初筛（水解圈法） 复筛（发酵法） 生产性能实验 菌种鉴定 菌种鉴定 标准曲线的制备 第一次实验： 讨论并设计实验方案； 实验材料准备：活化培养基、发酵培养基等； 活化：LB培养基，37℃摇床振荡16-24h 活化液体培养基 蛋白胨：10.0g； 酵母膏：5.0 g； 氯化钠：10.0g； 蒸馏水：1000ml pH到 7.0。 发酵液体培养基 葡萄糖：2.5g； 蛋白胨：5.0g； 酵母膏：2.5 g； 氯化钠：2.5g； 蒸馏水：1000ml pH到 7.0。 第二次实验： （一）标准曲线的制备： 参照《GB/T 23527-2009 蛋白酶制剂》 蛋白酶制剂： 第二次实验： （一）标准曲线的制备： 蛋白酶活性定义： 第二次实验： （一）标准曲线的制备： 标准曲线： 第二次实验： （一）标准曲线的制备： 标准曲线： 第二次实验： （二）发酵： 接种：将活化好的菌液按照2%接种量，接种至发酵培养基中； 培养：37℃，180rpm摇床振荡培养； 取样：分别取24h、48h发酵液测定其酶活。 第三次实验： （一）酶活测定： 参照《GB/T 23527-2009 蛋白酶制剂》 第三次实验： （二）菌种鉴定方案讨论： （三）菌种鉴定试验准备 三、数据结果 四、讨论分析 标准曲线 Folin-酚法测酶活 …… 五、参考文献（举例）