第十一章流式细胞术.ppt

三维坐标均为参数（散射光或荧光）而非细胞数 对复杂的细胞亚群观察更为直观、准确，但对其数据的统计分析较难 三、多维数据的显示 （一）三参数直方图 FCM常常需要分析三个以上的参数，但软件技术能够无法显示四维空间结构。 随着FCM多色荧光信号检测的发展，所得到的荧光信号和散射光信号需根据需要进行组合分析以获得所需的信息。 多参数分析能够同时比较各种细胞的不同抗原表达水平，可以统计出多种数据。 （二）多参数组合分析 双参数直方图是一种细胞与双测量参数的图形，X轴与Y轴分别代表一种参数。 双参数信号常采用对数信号，最常用的基本表示法是用点密图来显示。 如果把一个散点图分别投影到X轴和Y轴，可得到两个单参数直方图。 临床实践中常以多个散点图联合分析。 二、双参数直方图 指同一张单参数或双参数直方图中根据信号的强弱来划定分析区域，从而计算分析区域内的细胞数量。 Gate设置 2 Region设置 1 指在某一张选定参数的直方图上根据该图的细胞群分布选定要分析的特定细胞群，并要求该样本的所有其他参数组合的直方图只体现该群细胞的分布情况。 Region设置 Gate设置 返回章目录 淋巴细胞亚群的检测已成为某些疾病诊断、疗效评价和免疫功能检测的常规手段。 不同淋巴细胞亚群用普通光学显微镜、血细胞分析仪无法鉴别，其在分化成熟过程中表达的CD抗原特性也不同，利用流式细胞仪结合单克隆抗体技术能够准确分类计数淋巴细胞亚群。 第四节 流式免疫荧光技术的应用 一、淋巴细胞亚群分析 采用三色标记的单克隆荧光抗体，可对T细胞亚群进行分类。 Th细胞表达CD3+CD4+CD8- Tc细胞表达CD3+CD4-CD8+ （一）T淋巴细胞及亚群分析 成熟B细胞主要表达CD19、CD20、CD21、CD22分子，同时检测CD25分子，可进一步观察B细胞活化状态。 （二）B淋巴细胞及亚群分析 （三）NK细胞分析 目前临床上常采用三色荧光抗体标记将CD3- CDl6+CD56+淋巴细胞定为自然杀伤细胞（Natutal killer cell，NK细胞）。 项目 百分率(%) 绝对数(个/μl) 比值 总T淋巴细胞(CD3+CD19-) 50～84 955～2860 总B淋巴细胞(CD3-CD19+) 5～18 90～560 辅助/诱导性T淋巴细胞(CD3+CD4+) 27～51 550～1440 抑制/细胞毒性T淋巴细胞(CD3+CD8+) 15～44 320～1250 辅助/抑制性T淋巴细胞比值(CD3+CD4+/ CD3+CD8+) 0.71 ～2.78 NK细胞(CD3-CD16+CD56+) 7～40 150～1100 T淋巴细胞+B淋巴细胞+NK细胞 95～100 1530～3700 注：每个实验室宜建立本室的参考范围，不同人群、不同试剂、不同地区可能有差别 健康成年人外周血淋巴细胞亚群分析的参考区间 FCM在血液病诊断、治疗和预后判断方面，具有非常重要的价值。 二、白血病免疫表型分析 正确区别急性髓细胞性白血病（AML）和急性淋巴细胞性白血病（ALL）。 正确鉴别AML中的M0、M6、M7型。 正确诊断双系列型或双表型白血病。 正确诊断少见、疑难白血病。 发现仅表达个别次要非本系列相关抗原的白血病。 正常血细胞在分化发育成熟过程中，某些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的标记。 白血病细胞可用造血细胞分化抗原类标记检测。 FCM结合单克隆抗体的应用可以提高白血病分类诊断的符合率，是一种客观的检测手段。 FCM对白血病复发的主要根源，微小残留病灶（MRD）的检测具有高敏感性和特异性，早期检出MRD避免疾病复发。 FAB分类 CD13 CD33 CD11b CD14 HLA-DR CD34 CD117 MPO M0 + +/- - - + + + + M1 + + -/+ - + + + + M2 + + - - + +/- + + M3 + + - - - - + + M4 + + + + +/- +/- + + M5a + + +/- +/- +/- + -/+ M5b + + + + + + -/+ M6 +/- +/- +或- - +/- - + M7 - +/- - - + + ? - 典型AML的免疫表型特点 FCM是当前血小板研究中不可缺少的检测工具，可用于检测血小板的多项指标。 对血小板相关的多种疾病诊断、治疗和预防，以及抗血小板活化药物的研究、评价及治疗监测等方面具有重要意义和研究价值。 血小板分析一般通过SSC和FSC散射光对数取样设门。 三、血小板分析 基本原理：用某种荧光染料与网织红细胞内的RNA结合，再通过流式细胞术检测被染色的网织红细胞数目。 噻唑橙(t