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新疆工程学院 仪器分析实验指导 化学与环境工程系 基础化学教研室 实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁 一、实验目的 1、UV-5500型紫外-可见分光光度计的使用方法。 2、掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。 、吸收曲线标准曲线的绘制数据处理的基本方法二、实验原理 根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。 用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲(又称邻菲罗啉)邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物： 此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下： 2Fe3+ + 2NH2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl- 测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。本实验采用HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。 为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。 三、仪器与试剂1、仪器 UV-550型紫外-可见分光光度计、比色皿（1cm）、容量瓶、吸量管、洗耳球。 2、试剂 （A.R.）、浓盐酸A.R.）、盐酸羟胺（A.R.）、邻二氮菲（A.R.）、冰醋酸（A.R.）、醋酸钠（A.R.）。 四、实验步骤 1、标准溶液配制 1) 100μg·mL-1铁盐标准储备液的配制 准确称取0.8634g铁盐NH4Fe(SO4)2·12H2O(A.R)，置于烧杯中，加入20mL 6 mol·L-1 HCl溶液和少量水，溶解后，定量转移至1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀，得100μg·mL-1储备液。 2) 10μg·mL-1铁盐标准溶液的配制 用移液管吸取上述100μg·mL-1铁标准溶液10.00mL，置于100mL容量瓶中，加入2.0mL 6mol·L-1HCl溶液，用水稀释至刻度，充分摇匀。 3) 盐酸羟胺溶液（10%）：取10g盐酸羟胺溶于100mL水中。4) 邻二氮菲溶液（0.1%）：取0.g邻二氮菲加mL乙醇溶解，定溶至00mL容量瓶。5) HAc-NaAc缓冲溶液（pH≈5.0）：称取1g醋酸钠，加水使之溶解，在其中加入 mL冰醋酸，加水稀释至00mL。 6) HCl溶液。 2、邻二氮菲-Fe2+吸收曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（10μg·mL-1）5.0mL，放入50mL容量瓶中，加入1mL 10%盐酸羟胺溶液，2mL 0.1%邻二氮菲溶液和5mL HAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置10min，选用1cm比色皿，以试剂空白（即在0.0mL铁标准溶液中加入相同试剂）为参比溶液，选择460~560nm波长，每隔10nm测一次吸光度，其中500~520nm之间，每隔5nm测定一次吸光度。以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe2+的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。 3、标准曲线的绘制 用吸量管分别移取铁标准溶液（10μg·mL-1）0.0、2.0、4.0、6.0、8.0，10.0mL分别放入6个50mL容量瓶中，分别依次加入1mL 10%盐酸羟胺溶液，稍摇动；加入2.0mL 0.1%邻二氮菲溶液及5mL HAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置10min，用1cm比色皿，以试剂空白（即在0.0mL铁标准溶液中加入相同试剂）为参比溶液，选择λmax为测定波长，测量各溶液的吸光度。在坐标纸上（亦可利用计算机软件绘图），以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。 4、试样中铁含量的测定 从实验教师处领取含铁未知液一份，放入50mL容量瓶中，按以上方法显色，并测其吸光度。此步操作应与系列标准溶液显色、测定同时进行。 依据试液的A值，从标准曲线上即可查得其浓度，最后计算出原试液中含铁量（以μg·mL-1表示）。并选择相应的回归分析软件，将所得的各次测定结果输入计算机，得出相应的分析结果。 五、 1、邻二氮菲-Fe2+吸收曲线的绘制 （1）数据纪