第3章糖苷详解.ppt

* 展开剂：常用水饱和的有机溶剂为展开系统。 常用的有BAW（正丁醇-乙酸-水）4:1:5； 显色原理：糖的还原性或由于形成糠醛后引起的呈色反应。 纸色谱 (PC) * 苯胺-邻苯二甲酸 硝酸银：使还原糖显棕黑色。 三苯四氮唑盐：单糖和还原性低聚糖呈红色。 3,5-二羟基甲苯-盐酸：酮糖和含有酮糖的低聚糖呈红色。 同样适用于TLC 纸色谱常用显色剂 * 类似纸色谱 常用硅胶TLC 用硼酸或无机盐代替水制板，可增大载样量 含硫酸试剂只适用于TLC，不能用于PC，如硫酸乙醇溶液 薄层色谱(TLC) * 显色、检测 (1)本身有颜色的组分 (2)在紫外光照射下产生荧光的组分,可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出来。 (3)使用GF254硅胶薄层板 (4)碘蒸气熏 (5)5%-10%的硫酸乙醇溶液 (6)喷洒特殊显色剂 * 全甲基化 NMR谱：在13CNMR中，苷元羟基的成苷碳原子和与其相邻的碳原子的信号发生位移，而其他碳原子的信号不变。同时糖中的端基碳原子的信号与游离单糖端基碳原子的信号比较也发生位移。 （2）糖的连接位置的确定 * ①全甲基化 ②水解 游离羟基 游离羟基 全甲基化 * 苷全甲基化并水解后得到的甲基化单糖，其中游离的-OH的部位就是连接位置。 苷全甲基化反应常用的有四种方法： Haworth法 Purdie法 Kuhn法 Hakomari法：最常用的方法。 全甲基化 * 以硫酸二甲酯做试剂，在30%浓NaOH中进行。 Haworth法 * 以碘甲烷做试剂，Ag2O做催化剂。 比Haworth法甲醚化能力强。 Purdic法 * 所用溶剂为DMF（二甲基甲酰胺），其甲醚化能力有所增强。 Kuhn法 —改良的Purdic法 * Hakomari法 以NaH与CH3I做试剂，二甲基亚砜（DMSO）做溶剂。 反应机理为： * 优点：一次反应即可获得全甲醚化产物，反应速度大大加快。甲醚化能力最强。 缺点：NaH具有较强的还原能力，可能会使某些基团发生还原反应。 Hakomari法 * Methylation的其他方法 Dissolve the polysaccharide 2 mg in DMSO in a 2 mL vial. Add the stir bar. Add finely powdered NaOH and CH3I and close the vial. Stir the mixture at 100 rpm for 10 minutes. Repeat 2 times Dialysis overnight 透析过夜 freeze-dry hydrolysis—reduction—acetylation—GC-MS 多糖 水解------还原-------乙酰化 * 糖成苷后，糖的端基碳和苷元α-C、β-C的化学位移值均发生改变，这种苷化前后化学位移的变化现象，称为苷化位移。 端基碳 苷元碳 NMR方法： 苷化位移（glycosydation shift） * 端基碳、苷元α-C的化学位移值向低场方向移动5～6 ppm（+5～+6）单位； 苷元β-C的化学位移值向高场方向移动3～4 ppm（-3～-4）单位； 糖分子其他碳原子化学位移值变化不大。 苷化位移一般规律 * 水解后鉴定产物 缓和酸水解：低浓度的无机酸或中强度的有机酸（如草酸）；最常用。 酶水解： 使苷中部分糖水解。 还有乙酰解、全甲基解、甲醇解… （3）糖的连接顺序的确定 * 波谱分析法：MS法和NMR谱法。 MS：糖基的碎片离子或各种分子离子脱糖基的碎片离子峰，在电子轰击质谱（EI—MS）中，由于苷类是非发挥性的，常制备成全乙酰化物、全甲基化物，全三甲基硅醚化物进行测定。 NMR及2D-NMR：化学位移，HMBC 糖的连接顺序的确定 * 利用酶水解进行测定 利用 Klyne经验公式进行计算 根据NMR中糖的端基质子的偶合常数或端基碳原子的化学位移进行判断 （4）苷键构型的确定 * 麦芽糖酶：α-glu苷 转化糖酶：β-果糖苷 苦杏仁苷酶：β-glu苷 利用酶水解进行测定 * 测定苷及苷元的比旋度 求得比旋度差值 与糖的一对甲苷（α或β型苷的分子旋光度进行比较，数值相近者即是。 利用 Klyne经验公式进行计算--分子旋光差法 * 例：有一苷比旋度为-273.03，知是豆甾醇的葡萄糖苷，苷元豆甾醇比旋度为-210.04，求苷的构型？ （已知：葡萄糖甲苷α=+308.6 β=-66.4） * 解：-273.03-(-210.04)=-62.99° 与题给出的β型-66.4接近，故该苷构型为β型。 * 在糖的1H-NMR谱中，端基质