1胡必杰-肺部感染诊断难点：病原学诊断的规范化和新技术详解.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 挑战： 我国临床微生物实验室对呼吸道病毒检验技术严重滞后 案例 重症社区肺炎的病毒类微生物很难送检 原因 大多数快速检验的试剂盒国内没有引进 通常送CDC实验室程序复杂 早期快速诊断有难度 * Dr.HU Bijie * * Dr.HU Bijie * 我国亟需引进、建立非培养的病原体检测技术 GM试验，G试验 军团菌和肺炎链球菌尿可溶性抗原检测 肺炎支原体、肺炎衣原体血清学检测 呼吸道病毒检测 * * * * * * * * * * * * * * * 143. Iatron serotyping kit can be used to serotype isolates of Cryptococcus neoformans. * * * * * * * * * * * * * * * * Dr.HU Bijie * 湿片检查 真菌检查：与含有10%甘油的10%KOH混合于载玻片上，盖上盖玻片，湿盒中放置15～30min 有经验的技术员可轻易识别皮炎芽生菌、粗球孢子菌和新型隐球菌； 可检出丝状菌； 有动力的病原体，如一种引起二重感染的粪小杆线虫，可以在湿片中发现。 鞭毛虫（？） * Dr.HU Bijie * * Dr.HU Bijie * BAL离心沉淀物细胞学检查推荐 微生物 涂片数量 染色方法 细菌 1 革兰染色 军团菌 5 荧光抗体染色 真菌 2 Gomori乌洛托品银染色，湿片检查 分枝杆菌 3 抗酸染色 病毒 含单克隆抗体染色测CMV、HSV等 肺孢子菌 3 Gomori乌洛托品银染色 * Dr.HU Bijie * 咳痰培养必须用半定量方法 定性鉴定的普通培养方法不易区分感染菌或污染菌； 标准定量培养方法繁琐，建议用半定量方法； 方法：四区划线接种标本进行培养，每划一区后均需火烧接种环，使细菌在平板上生长数逐级下降； 报告：优势菌生长菌落为3+或3+以上。也可分大量heavy、中等量moderate和少量scattering生长三种； 可以只鉴定和报告优势生长的需氧菌和兼性厌氧菌。只在原始区生长的少数菌不必作常规鉴定，除非临床或直接革兰染色提示可能为感染的病原菌。 * Dr.HU Bijie * 划线接种平板半定量判断标准 分级 划线区域菌落数 原始区 第二区 第三区 1＋ ＜10 2＋ ＞10 ＜5 3＋ ＞10 ＞5 ＜5 4＋ ＞10 ＞5 ＞5 * Dr.HU Bijie * 痰标本的培养基选择 培养基包括分离和鉴别革兰阳性菌的血平板、革兰阴性菌鉴别的平板如麦康凯平板； 涂片显示嗜血杆菌样或奈瑟菌样的优势菌（每油镜视野≥10个细菌）时，应增加接种富含营养的巧克力平板，分离流杆、脑膜炎、卡他； 痰涂片发现较多GNB或系医院内肺炎的痰标本，应加麦康凯平板； 应少用培养平板进行细菌分离，要熟悉细菌在培养基上的生长模式，而不是靠选择培养基。 * Dr.HU Bijie * 培养环境：CO2 平板置于3％～10％CO2中35-37℃孵育。 烛缸可基本达到这一要求，但近年来的研究显示用CO2培养箱分离肺炎链球菌和流感嗜血杆菌要明显优于烛缸。 为提高细菌培养和分离质量，细菌室应常规配备CO2培养箱，呼吸道标本在初代培养时尤为重要。 * Dr.HU Bijie * 菌落观察与鉴定 平板孵育过夜（18-24h），观察并记录有几种不同的菌落类型。 咳痰标本：优势菌几种菌落应分离鉴定。 直接采集的下呼吸道标本如PSB、BAL、TNA、胸腔穿刺液中生长的所有菌落类型均应鉴定。 如果病人已接受抗生素治疗或革兰染色所见细菌未分离到，48h后应重新观察平板。 某一菌落是否需要鉴定，应根据其引起下呼吸道感染的可能性和病例的临床特征来决定。 * Dr.HU Bijie * 链球菌 α溶血的链球菌：必须采样客观的方法如Optochin试验、胆汁溶解试验和荚膜肿胀试验，来鉴别草绿色链球菌和肺炎链球菌。 草绿色链球菌：不要进一步鉴定至种水平。 β溶血性链球菌：至少应根据免疫方法或杆菌肽敏感性测定，鉴定为A群和非A群链球菌。 非溶血性链球菌：如此报告即可，不必鉴定至种水平。 * Dr.HU Bijie * 葡萄球菌 金葡菌：致病力较强，必须与其他葡萄球菌相鉴别。 其他葡萄球菌：很少引起下呼吸道感染，通常报告为凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）便可。如果是血液或通常为无菌部位标本如胸水分离出的细菌，或医院感染标本需要追踪传染源时，应进一步做有关生化试验将凝固酶阴性葡萄球菌鉴定至种的水平。 * Dr.HU Bijie * 卡他莫拉菌和脑膜炎奈瑟菌 卡他莫拉菌：肺炎的常见病原菌，要分离、鉴定痰培养中