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动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2.原理:细胞增殖 动物细胞生长特性: 1.细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上, 称为细胞贴壁。 要求: 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 2.接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。 1、无菌、无毒的环境 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液) 2、营养 (葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等、维生素。) 3、温度和PH 36.5 +0.5度 ;PH为7.2-7.4。 4、气体环境: O2和CO2(95%空气和5% CO2 ) 二、动物体细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 四、单克隆抗体 * * 考纲点击 考情示例 植物组织培养Ⅱ 动物的细胞培养与体细胞克隆Ⅰ 细胞融合与单克隆抗体Ⅱ 2013四川1、江苏11、课标全国卷Ⅱ40、天津9、重庆2、海南31、浙江6 2012广东2、江苏22、北京31 2011江苏14,16、广东3 2015高考导航 细胞工程 动物细胞工程 常用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 核移植 _________________是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞培养技术 1.概念 3.过程: 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 (单个细胞) 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质改变 剪碎 细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。 原代培养:将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 传代培养:用胰蛋白酶将出现接触抑制的贴壁细胞从培养瓶壁上脱离下来,制成细胞悬液,分装到多个培养瓶中继续培养,这个过程叫传代培养。 上述过程中,在第一培养瓶中培养到接触抑制就是原代培养,之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 补充合成培养基中缺乏的物质 4.动物细胞培养的条件 (1)生产蛋白质生物制品:病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2)获得大量自身的皮肤细胞,用于植皮。还可作为基因工程中的受体细胞。 (3)用于检测有毒物质,判断某种物质的毒性。 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据 5.动物细胞培养技术的应用 获得细胞 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物组织培养和动物细胞培养的比较 1.核移植 胚胎细胞核移植 体细胞核移植(难度高) 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 2.体细胞核移植过程(体细胞克隆动物) 3.体细胞核移植技术的应用前景 畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛应用前景 1加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育 2保护濒危物种,增加动物 的存活数量 3可作为生物反应器,生产医用蛋白,克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体,了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等 4.体细胞核移植技术存在的问题 1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷,如体型过大,异常肥胖,发育困难,免疫失调等。 2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。 5.克隆动物的研究意义 1.克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病,作为供体 4.保护濒危动物 诱导方式 物理法 化学法 生物法: 灭活的病毒 三、动物细胞融合 1.方法 是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞的过程。 2.动物细胞融合的原理: 细胞膜的流动性 什么是抗体? 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的
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