第三章RNA的转录机制教案.ppt

本章主要内容 1、转录是基因表达的中心环节 2、转录涉及的酶与过程 3、转录后的加工 1 转录是基因表达的中心环节 转录是以 DNA为模板合成RNA, 并且只是以单股DNA 为模板，因此具有不对称性； 用以转录的单链DNA, 称为模板链, 与复制不同，转录是局部的,从启动子开始到终止子结束,为一个转录单位; 转录不需要引物； 转录首先得到RNA前体，然后再进行加工转变为成熟的RNA. 由5种亚基组成： 全酶= 核心酶（α2ββ’）+ σ因子 α亚基决定转录的基因 β亚基在5’——3’方向上延长多核苷酸链，其方式与DNA 聚合酶相同，原料为NTP，没有纠错的功能。 β’亚基结合DNA模板 σ因子识别“启动子”并与之结合 RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别 不对称转录（asymmetric transcription） DNA上的转录起始序列，称为启动子，有序列保守性，不仅是转录起始的位置，而且影响转录的活性。 真核生物启动子的结构 1、核心启动子 定义：指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区 2、上游启动子元件 ●包括CAAT盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等 转录起始复合物 ● 原核生物转录起始复合物 转录因子 转录复合体 TBP TAFs TFIIA TFIIB TFIIF Pol II TFIIE RNA pol Ⅱ的转录起始 过程：启动子的选择、转录起始、RNA链的延伸、终止 启动子的选择 包括RNA聚合酶全酶对启动子的识别，聚合酶与启动子可逆性结合形成封闭复合物—— DNA链仍处于双链状态。接着，随着DNA构象上的变化，封闭复合物转变为开放复合物，聚合酶全酶所结合的DNA序列中有一小段双链解开。 A. 依赖ρ因子的终止 新生RNA上有ρ因子的识别位点。它与聚合酶-DNA-RNA复合物结合，向3’端移动，并解开DNA-RNA杂交体，需ATP。弱终止子 －需要ρ因子 B. 依赖于特定序列的终止（不依赖ρ因子的终止） 转录终止区有特殊结构。终止区的上游有GC二重对称区，转录的RNA容易形成多个“发卡”结构, 转录产物的3’端有polyU序列。这种特殊的二级结构阻止了转录向下游继续推进。强终止子－内部终止子 不依赖?因子的终止 终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区，RNA形成发夹结构； 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，长度 效率 依赖?因子的终止 转录得到的只是RNA的初级产物，通常要经过加工，才能转变为成熟的RNA。tRNA 和rRNA的转录后加工比较简单. mRNA转录后的加工 原核生物的结构基因（编码的）是多顺反子（poly-cistron），通常是将几个相关的结构基因一起转录得到多个mRNA。 （顺反子cistron 一词可以视作基因的同义词）。 而真核基因是单顺反子（mono-cistron），其mRNA 的转录比较复杂, 因为真核通常只转录出一个结构基因,而且其结构基因通常又是断裂基因, 即是由编码的外显子（exon）和不编码的内含子（intron）间隔排开组成的。因此, 转录得到的仅仅是mRNA的“毛坯”，称为核不均RNA（hnRNA），要进行转录后的加工-----------在其5’端加上鸟嘌呤“帽子”，3’端加上polyA的“尾巴”，再切除内含子，将外显子拼接，才能成为一个成熟的mRNA。 5’端的一个核苷酸总是7-甲基鸟核苷三磷酸（m7Gppp）。mRNA5’端的这种结构称为帽子（cap）。 通过5′→5′磷酸二酯键在原初mRNA的5’端倒扣一个“G”。 ?在新生mRNA链达到50个核苷酸前，甚至可能在RNA PolII 离开转录起始位点之前，帽子结构就已加到mRNA的第一个核苷酸上了。 ?5′末端加上鸟苷是由鸟苷转移酶催化的。 ?帽子结构是GTP和原5’三磷酸腺苷（或鸟苷）缩合反应的产物。 ?mRNA的帽子结构常常被甲基化。 真核生物mRNA的“