制药工艺学考试终极版2解析.doc

基因根据功能的不同可分为结构基因、调节基因和操纵基因。结构基因包括转录启动子、基因编码区和转录终止子。 生物制药产业化特点：高技术、高投入、长周期、高风险、高回报 1生物制药工艺学研究内容和对象生物包括生化制药工艺、微生物制药工艺、生物技术制药工艺、生物制品制造与相关的生物医药产品的生产工艺，同时还讨论各类生物药物的来源、结构、性质、制造原理、工艺过程、生产技术操作和质量控制。 2生物制药工艺学历史事件a传统生物制药发展阶段:酿酒、制醋的酿造用羊肝治疗“雀目”；李时珍本草纲目b近代生物制药发展阶段:青霉素开发成功并工业化生产，抗生素、氨基酸及酶制剂工业占据重要地位；生物分离纯化技术与设备开始广泛应用c现代生物制药发展阶段: DNA 双螺旋结构；体外重组、DNA方法；重组人胰岛素投放市场 3生物制药工艺学特性药理学特性(活性高,针对性强, 毒副作用小)理化特性(有效成分含量低，杂质种类多且含量较高；生物活性物质结构复杂、稳定性差)生产制备的特殊性;检验的特殊性;剂型要求的特殊性 4生物制药工艺学分类按药物化学本质、特性(1)氨基酸类及其衍生物(2)多肽及蛋白质类(3)酶类(4)多糖类(5)脂类(6)维生素与辅酶.按原料来源；人体组织,动物组织,微生物,植物,海洋生物,按功能用途治疗药物,预防药物,诊断药物；按工艺技术（天然生化药物、生物制品、生物技术药物 ） 5生物制药工艺学技术手段天然生物材料提取制药—发酵工程制药—酶工程制药—细胞工程制药—基因工程制药 6基因工艺学概念及要素【DNA重组技术】是指将供体的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序[供体、受体、载体是三大元件].【基因工程】重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术（上游技术-重组DNA技术；下游技术-基因工程菌或细胞的培养及产物的分离纯化过程）【要素】外源DNA、载体分子、工具酶和受体细胞 7基因工程理论、技术基础[理论基础]分子遗传学。[技术基础]分子生物学和微生物学的现代方法。将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段 8基因工程基本程序 切接转增检表A.DNA分子体外重组（切、接）：用一定的限制酶切割质粒，使之出现一个黏性末端切口，再用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端，然后将目的基因片段插入质粒切口，加入适量DNA连接酶，使目的基因与质粒形成重组质粒B.重组DNA分子的转化和扩增（转、增）：将重组质粒导入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定、表达和扩增的过程C.转化子的筛选和鉴定（检、表）：检测受体细胞染色体DNA上是否含有目的基因。检测目的基因是否完成表达翻译成蛋白质 9获取目的基因的方法、原理及特点A.用限制性内切酶直接从染色体DNA中分离。原理：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA的所有片段分别在受体细胞中大量复制，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定方法把带有目的基因的DNA片段分离出来特点：操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去B.化学合成法。原理：由已知氨基酸序推测可能的DNA序列特点：较小的蛋白质或多肽的编码基因适合此法；先决条件是必须知道目的基因的核苷酸序列或目的蛋白质的氨基酸顺序C.基因组DNA文库（逆转录法）原理：以编码某特异多肽的mRNA为模板，在逆转录酶作用下反转录成该多肽mRNA的互补DNA（cDNA）；再以cDNA为模板，在逆转录酶或DNA聚合酶I作用下，最终合成编码该多肽的双链DNA特点：可用于真核生物目的基因的获得D.聚合酶链式反应（PCR）。方法原理：是一种在体外利用酶促反应模拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术在有少量双链DNA模板、RNA引物、四种dNTP、TaqDNA聚合酶、解旋酶、DNA连接酶；合适的缓冲系统（Mg2+）下，通过仪器控制DNA变性（加热至95℃，模板DNA变形为单链）、退火（将温度降至50℃，使引物与模板DNA退火结合）及延伸（将温度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应）的温度与时间，来合成新的DNA链，新合成的DNA链又可作为下一轮循环的模板。理论上经n次循环后，DNA链可达2n特点：可以使指定的基因片段数量放大。 基因组文库与cDNA文库的区别：cDNA文库是有时效性的。文库构建时的信息供体是某一时空条件下的细胞总mRN