氯霉素ELISA快速检测试剂盒.docVIP

氯霉素ELISA快速检测试剂盒 使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 产品编号：CSB-E1203f 检测范围：ng/ml-10 ng/ml 最低检测限：0.2 ng/ml 特异性：本试剂盒可用于快速检测。有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定。说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。实验原理 微孔板转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。 标准品（Standard）：×250ul/瓶 样品稀释液(Sample Diluent)：×20ml/瓶。（HRP-anti-antibody?）×20ml/瓶。1×60μl/瓶（1：100） 辣根过氧化物酶标记二抗（HRP-anti-antibody?）1×120μl/瓶（1：100） 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 标准规格酶标仪 高速离心机 电热恒温培养箱 超声清洗器 离子交换小柱（PCX） 氮气吹干仪 干净的试管和Eppendof管 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 蒸馏水，容量瓶等标准品：瓶，ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml， ng/ml， ng/ml，0.312 ng/ml。稀释液直接作为标准浓度0 ng/mlng/ml） 10 5 2.5 1.25 0.625 0.312 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 每次浸泡1-2分钟，ul/每孔，甩干加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液ul，余孔分别加标准品或待测样品ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀酶标板加上盖或覆膜，37℃反应0分钟。温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板次，每次浸泡1-2分钟，50ul/每孔，甩干。 尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀酶标板加上盖或覆膜，37℃反应0分钟 温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，50ul/每孔，甩干。 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的3-4孔有明显的梯度蓝色，3-4孔不明显，即可终止）。 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 注： 1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、工作液。 5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度