基因工程工具概要.ppt

专题一 基因工程 限制酶作用过程 DNA连接酶的作用过程 * * 1.1 DNA重组技术的基本工具 一、基因工程的概念 原理 目的 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 培育新的生物类型和产品 基因重组 基因工程概念的分析 分子手术刀-- 分子缝合针-- 分子运输车-- 限制性核酸内切酶（限制酶） DNA连接酶 载体 二、 DNA重组技术的基本工具 P4 1、限制酶 ── “分子手术刀” （1）、来源： 主要是从原核生物中分离纯化出来。 约4000种限制酶。 （2）、种类： 能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 （3）作用： （4）结果： 形成两种末端 黏性末端 ECORI 平末端 SmaI 点击播放 EcoR 1 黏性末？端平末端？ 当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端。当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 2、 DNA连接酶——“分子缝合针” （1）来源 （来自大肠杆菌） （来自T4噬菌体） E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 （2）作用： E.coliDNA连接酶 —— T4 DNA连接酶—— 　连接黏性末端和平末端。 但连接平末端的效率比较低。 连接黏性末端。 点击播放 核苷酸分子的连接： A T G C A T G C 连接酶连接磷酸二酯键 3、基因的运载体--分子运输车 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？ 议一议 5、能否用SARS病毒作为基因载体？ 3、作为载体，若没有切割位点将怎样？ 4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞，如何鉴定？ 2、假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将怎样？ 1、从化学组成来看，载体应含有什么成分？ 双链DNA 不能 不能进行DNA的重组 载体上应有标记基因 可能造成基因丢失 作为载体的必要条件 1.能自我复制 能进入受体生物细胞并在受体 生物细胞内复制并表达。 2.有一个至多个限制酶切割位点 ，以便能 3.具有某些标记基因 。以便进行筛选。 4.对受体细胞无毒害作用。 否则受体细胞 与外源基因连接。 将受到损伤甚至死亡。 练习 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 * *