菌株使用保管制度.docVIP

江门市凯林贸易有限公司 质管部 实验室菌种的收集、使用、保管程序 版次 第1次修改 页码 受控状态 受控 编号 目的: 规范实验室菌种的收集、使用、保管程序；确保本管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。3.1菌种保管员：按照本指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作。3.2科室负责人：负责监督菌种的使用及管理。 4.管理细则本实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体；保存的菌种主要用于各类培养基、检测试剂的性能测试和质量控制。4.1在本实验室保管的菌种名保留工作菌种：大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2a ATCC12022、副溶血性弧菌200904-1、金黄色葡萄球菌ATCC25923、溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、克雷伯氏杆菌、 枯草芽胞杆菌ATCC6633b 、白色念珠菌ATCC10231、4.2 菌种的保管4.2.1实验室菌种保存于专用的。4.2.2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种。4.2.3菌种应按规定的时间定期转种，一般每转种3及时处理。4.2.5保管人员工作变动时应作好交接工作。 4.3 菌种的使用和保存4.3.1菌种的类别4.3.1.1实验室内的标准菌种根据用途不同，分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。①储存菌种：以冷冻保藏为主，用于菌种的长期保存，一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的标准菌株，用符号S表示。一般可保存5年。②传代用菌种：采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，用于菌种的传代，用符号G表示。甘油冷冻管保藏法一般可保存2年；③工作菌种：保存于半固体内或琼脂斜面培养基中，作为工作用菌种，用符号W表示。一般可保存1～2个月。4.3.2菌种的接收菌种购到实验室后，应在菌种接收记录上填写所购菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。贴好标签后储存。4.3.3冷冻干燥菌种的恢复培养  按菌种保藏中心的要求进行恢复培养。中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)建议的方法如下：①安瓿管开封：用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰将安瓿管顶端加热，滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂，用锉刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。 ②菌株恢复培养：用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基（如营养肉汤），滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面/平板培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下（一般培养温度32.5℃±2.5℃，18～24h）培养。 ③注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在5-10℃的环境下；某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。 从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。按转种次数确定菌种的代数：①冷冻干燥的菌种在液体培养基内恢复培养（第1代）后，转种至平板培养基上得到单个纯菌落，此为第2代。菌种传代一般不超过5代。②鉴定菌种后制甘油冷冻管 经菌种特性鉴定后，挑取平板上纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，此作为第2代传代用菌种（G2）；同时挑取纯菌落转接斜面，此菌种作为工作用菌种，为第3代（W3）。③将第2代传代用菌种（G2）管冷冻保存（-30℃以下），将第3代工作用菌种（W3）以适当温度下培养适当时间后可用于实验。④取一支冷冻保存的第2代传代用菌种（G2）转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成甘油冷冻管，为第3代传代用菌种（G3）；斜面培养基经适当温度下培养适当时间后可用作第3代工作用菌种（W3）。⑤当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如W3可直接转接为W4。⑥按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序保藏和使用菌种。 4.3.5.1甘油冷冻管保存法 甘油冷冻管保存法适用于保存传代用菌种，一般可保存2年。①将待保存用菌种接种至平板或琼脂斜面，经37℃24～48h培养后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，移至预先装有无菌蒸馏水的试管中，调整菌液浓度，使其等同于1单位麦氏比浊管。②向已制备好的菌悬液中加入等体积，浓度为20%的无菌甘油，得到10%甘油菌悬液。③轻轻振摇，使10%甘油菌悬液充分混合，分装于无菌小试管中，在-30℃条件下贮存。 液体石蜡覆盖保藏法适用于保存传代用菌种，一般可保存3-6个月。①取纯化菌种穿刺接种于半固体培养基中，经37℃18～24h培养后，加无菌液体石蜡覆盖半固体表面（高度1厘米