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1.1 DNA重组技术的基本工具 高二生物组 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 限制性内切酶 黏性末端和平末端 限制酶在原核生物中有什么作用？ 限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 限制酶不会将自己的DNA 切割吗？ 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 DNA连接酶——“分子缝合针” 种类：两种： 一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。 一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 特点： E·coli连接酶只能连接黏性末端； T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。 结果：脱水缩合形成磷酸二酯键 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？ 基因的载体——“分子运输车” 质粒 * * 分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 切割位点：磷酸二酯键 举 例：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 结果：形成两种末端 限制酶 议一议 2、能否用SARS病毒作为基因载体？ 3、作为载体，若没有切割位点将怎样？ 4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞，如何鉴定？ 5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将怎样？ 1、从化学组成来看，载体应含有什么成分？ 双链DNA 不能 不能进行DNA的重组 载体上应有标记基因 可能造成基因丢失 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 载体必须具备的条件： 1、具有一个或多个限制酶切点。 2、能够进行自我复制，或整合到染色体DNA上进行同步复制。 3、具有特殊的标记基因，便于重组后的筛选。 4、对受体细胞无害。 5、大小应合适，以便提取和在体外进行操作。 记笔记 质粒是基因工程最常用的运载体。 它是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的环状DNA分子。 大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 * * *