色氨酸代谢产物对肝癌细胞解析.ppt

色氨酸代谢产物对肝癌细胞的作用 姓名:杨洁 专业：消内科 立论依据 一 研究意义 （1）原发性肝细胞癌（HCC）是我国常见恶性肿瘤之一，在消化道肿瘤中，其发病率仅次于胃癌。目前肝癌的治疗，除手术治疗外，化疗、放疗、生物和免疫治疗等多种治疗措施的综合运用，为提高患者生存率起到了积极的作用。但是至今，并没有找到根治肝癌的有效方法。 (2)自 Tayor等提出IFN-γ对肿瘤生长的抑制作用是其诱导色氨酸代谢所致的观点后，与色氨酸分解代谢有关的酶——吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）和肿瘤的关系开始倍受关注。 近期的研究发现，在不同类型的肿瘤中，IDO可以扮演完全不同的角色。 在急性髓细胞样白血病、黑色素瘤等肿瘤中，IDO可以通过抑制T细胞，从而促进肿瘤的生长；而在肝癌等肿瘤中，IDO的存在可以提高机体的抗癌细胞作用,目前这一作用的具体机制尚不十分清楚。 （3）IDO是色氨酸分解代谢的限速酶，对色氨酸沿犬尿酸途径进行分解起到了重要作用。 IDO在多种组织中有表达，在感染、肿瘤、器官移植、自身免疫性疾病以及妊娠期间，IDO的活性增强，加速色氨酸的分解。脂多糖（LPS）、IFN-γ等细胞因子能够诱导巨噬细胞、树突状细胞等表达IDO。 IDO的分子式为： NH2 O NH2 OH O IDO为偏脂溶性物质，可溶解于DMSO溶剂中。 二 国内外研究现状： Ishio T等在体外培养实验中发现，外周单核细胞加入肝癌细胞株HepG2或PLC/PRF/5共同培养后，可显著诱导单核细胞中IDOmRNA的表达。外周单核细胞抗肝癌细胞的细胞毒性作用正好与IDOmRNA的表达水平成正比，加入IDO的抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT）后可以降低细胞毒性作用。IDO阳性的肝细胞癌病人在肝切除术后，无复发生存率高于IDO阴性的患者。 二 国内外研究现状： Kai S等证明IDO可以增强NK细胞杀伤K562细胞(慢性髓性白血病细胞系)和HepG2细胞的功能。给与1-MT可以降低老鼠NK细胞毒素的活性。 二 国内外研究现状： Guido Frumento 等证明L-犬尿素、邻吡啶甲酸和喹啉酸等色氨酸代谢产物可以抑制某些淋巴细胞的增殖。此效应在色氨酸缺乏时更为明显。 Dariusz Pawlak 等发现喹啉酸在1000μM/L浓度水平上可以降低HepG2细胞的活性。 二 国内外研究现状： 总之，IDO抗肝癌细胞的作用机制尚处于摸索阶段，还有许多值得研究的地方。本课题将主要研究色氨酸在IDO催化下分解生成的几种代谢产物对肝癌细胞的生长和凋亡有何影响。 研究方案 一 研究目的 观察色氨酸经IDO催化后分解生成的各种代谢产物的量及其代谢产物对肝癌细胞的生长及凋亡的影响，为临床治疗肝癌提供新思路。 二 研究内容 高效液相色谱法测定色氨酸代谢产物的量。 肝癌细胞的培养。 MTT法测定代谢产物对HepG2细胞的增值的抑制作用及色氨酸缺乏对这一作用的影响。 流式细胞术观察代谢产物对肝癌细胞细胞周期的影响。 三 拟解决的关键问题  1 HepG2细胞的培养 2 从细胞水平来验证色氨酸的代谢产物对肝癌细胞是否有抑制增殖、周期阻滞、诱导凋亡的作用。 3 各代谢产物浓度范围及作用时间的选定均为本试验的技术关键 4 利用高效液相色谱法对色氨酸的代谢产物进行定量分析 四 技术路线(第一步） 。HepG2细胞株 体外培养细胞浓度达到104/ml 分0.1,1,10，100，1000 μM/L浓度加入代谢产物?12h,24h,36h,48h后分别检测 MTT法  HepG2细胞抑制率 统计学分析 四 技术路线（第二步） 。HepG2细胞株 体外培养细胞浓度达到104/ml