沙门氏菌和志贺氏菌的检测解析.ppt

沙门氏菌和志贺菌检测 熊 长 辉 沙门菌检测 美国细菌学家Salmon与Smith于1885年分离出猪霍乱沙门菌。1990年为纪念Salmon，定名这类细菌为沙门菌属。 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。包括伤寒、副伤寒甲、乙、丙型，肠炎，鼠伤寒等沙门菌，现今已发现2324个血清型。 在世界各地的食物中毒中，沙门菌食物中毒常占首位或第二位。规定在药品和食品中不得检出沙门菌。美国每年报道病例45 000个左右，实际数量可能多达200-300万。伤寒每年400-500例。 生物学特性 培养和生化反应 兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长PH为6.8～7.8.本菌属对营养的要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润，半透明，边缘整齐的菌落，有时可出现粗糙型的菌落。在肠道选择性培养基上菌落小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似，有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂上形成中心黑色的菌落。 抗原构造 菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。现已知有50多种，多数沙门菌含有两种以上的O抗原，有的O抗原是一种菌独有的，有的是几种菌共有的，凡含有共同特异性抗原成分的血清型归为一个群，可将沙门菌化分为42群，按A-Z排列，Z以后的顺序以O51-O67表示。引起人类沙门菌病的95%以上都在A-F 6个群内。 H抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙醇处理均被破坏。沙门菌H抗原有两个相,第一相特异性较高称特异相,用小写英文字母a、b、c表示，直至z，z以衙用z加阿拉伯数字表示，如z1、z2、z3等，第二相抗原为沙门菌共有，称非特异相，直接用1、2、3表示。同时有第一相和第二相H抗原的细菌称为双相菌，仅有一相者称单相菌。H抗原是定型的依据，其刺激机体产生的抗体以IgG为主，与相应的抗血清呈絮状反应。 M抗原：粘液抗原，在菌型鉴定上无特殊意义。 5抗原： 4.抵抗力 不强，加热60℃1h，或65℃15~20min即被杀死。在水中能存活2~3周，在粪便中可存活1~2月。对胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用于制备沙门菌的选择培养基。 5.变异性 S-R变异:自临床标本初次分离的菌株一般都是光滑型，经人工培养，传代后可逐渐变民粗糙型菌落。此时菌体表面的特异多糖抗原丧失，在生理盐水中可出现自凝。 H-O变异：是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异 位相变异：具有双相H抗原的沙门菌变成只有其中某一相的单相菌，称位相变异。在沙门菌血清学分型时，如遇到单相菌，特别是只有第Ⅱ相（非特异相）抗原时，需反复分离和诱导出第Ⅰ相（特异相）抗原方可作出鉴定。 V-W变异：是指沙门菌失去Vi抗原的变异。初次分离得到的具有Vi抗原、O抗原不凝集的沙门菌称V型菌；Vi抗原部分丧失，与O抗原血清发生凝集又可与Vi抗血清凝集者称VW型菌。 Vi抗原完全丧失，与O抗原血清发生凝集又与Vi抗血清不凝集者称W型菌。V-W变异的过程是V型菌经人工培养，逐渐丧失部分Vi抗原而成为VW型，进而丧失全部Vi抗原而成为W型菌。 二、微生物学检查 标本采集 根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。分离培养原则上于发病第1周采血，第2周取粪便或尿液，全程均可作骨髓培养。血清学诊断应在病程的不同时期分别采集2～3份标本。 检验方法 直接检测 将病人标本或肉汤增菌培养物直接用商品乳胶凝集试剂进行试验，可快速检出沙门菌和志贺菌。 检验方法 分离培养 常规的肠道选择鉴别培养基能有效地分离沙门菌。常用肠道鉴别培养基（MAC或EMB）和选择培养基（SS等），强选择性培养基（孔雀绿和亚硫酸铋等）仅适用范围于暴发流行时。 分离培养 （1）血液和骨髓：血液5ml或骨髓液0.5ml胆汁葡萄糖肉汤或胰化蛋白大豆肉汤中，35-37℃孵育，若有生长（多在2~4日内出现）则移种至血琼脂平板和SS培养基中。 （2）粪便或肛拭：最好作床边接种，或用卡-布（Cary-Blair）运送培养基。 （3）尿液和体液：无菌采集的中段尿、胆汁、脑脊液、胸腹水等经3000r/min离心沉淀后接种于增菌液、血琼脂和肠道选择培养基。 （4）食物等固体物质：磨碎后加10ml无菌生理盐水混匀，接种于增菌液和肠道选择培养基。 鉴定与分型——生化鉴定 疑为沙门菌的可疑菌落可用手工或商品生化反应进行生化鉴定，常用三糖铁(TSI)琼脂和赖氨酸琼脂来初步鉴定。本菌在TSI上典型的生化模式为：碱/酸，葡萄糖产气，硫化氢阳性（K/A++）。少数菌株为乳糖发酵型，呈（A/A），这些菌株的硫化氢往往阴性。在赖氨酸铁琼脂上的典型生化模式为K/K和硫化氢阳性，但亦存在赖氨酸和硫化氢阴性的菌株（副伤寒A沙门菌）。初步反应疑为沙门菌的菌