色谱法引论精要.ppt

* * * * 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线的线性范围内，色谱峰如果对称，可用Gauss正态分布函数表示： 式中：C—不同时间t时某物质的浓度，C0—进样浓度，tr—保留时间，σ—标准偏差。 5-3 色谱法分析的基本原理 色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。因此，要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。 （5）分配系数和分配比（容量因子） 分配系数： 一定温度与压力下两相达平衡后， 组分在固定相和流动相浓度的比值 分配比（容量因子）： 一定温度与压力下两相达平衡后， 组分在固定相和流动相量的比值 固定相重量 流动相重量 K与k的关系： （6）容量因子k与保留值的关系 组分在两相中的质量比等于组分在液相中的停留时间与气相中的停留时间之比 色谱基本保留方程 四、分离效能指标 1、选择性（相对保留值） 相对保留值由两组分的热力学性质决定，与色谱柱的长短粗细无关。 2、峰宽度 3、分离度 分离度考虑了保留时间和峰宽度，是一个综合指标： R 1.0 两峰明显重叠 R = 1.0 两峰达97.7%分离 R ? 1.5 两峰完全分开 二、塔板理论 最早由Martin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引人理论塔板数作为衡量柱效率的指标。 该理论假定： （i）在柱内一小段长度H内，组分可以在两相间迅速达到平衡。这一小段柱长称为理论塔板高度H。 （ii）以气相色谱为例，载气进入色谱柱不是连续进行的，而是脉动式，每次进气为一个塔板体积（ΔVm）。 （iii）所有组分开始时存在于第0号塔板上，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。 （iv）分配系数在所有塔板上是常数，与组分在某一塔板上的量无关。 r —— 塔板数 N—— 转移次数 设：有A、B两组分，kA = 2 kB = 1/2 当 N = 0 r = 0 A组分在两相分配达平衡后： 流动相分量= 固定相分量= r0 r1 r2 。 。 。 。 。 。 。 。 rn 下表列出经过各级转移后组分在每一级塔板中的量： r0 r1 r2 。 。 。 。 。 。 。 。 rn 当经过1次转移（N=1）以后： 第0级塔板：r = 0 组分的分量 = 第1级塔板：r = 1 组分的分量 = 组分在两级塔板上的量可表示为： 若抽象成一个规律： 由上表可以看出，经N次转移后，组分在各级塔板上的量符合二相式分布，即 当N = 4时，组分分布在5级塔板上： 以A组分为例，5级塔板上的分量分别是： t C tR Cmax 对于两个组分A和B，如果k不同，则流出曲线的形状不同： 由于所获得的流出曲线在N很大时呈正态分布， 可知： m为组分质量，Vr为保留体积，n为理论塔板数。 当V=Vr 时，C值最大，即 或： 根据： 所以： n 称为色谱柱的理论塔板数。 因为tR是热力学常数，当色谱柱的长度一定，理论板数目n越大，色谱峰越窄。 从上两式可以看出，色谱峰W越小，n就越大，而H就越小，柱效能越高。因此，n和H是描述柱效能的指标。 通常填充色谱柱的n＞103，H＜1mm。而毛细管柱 n=105--106，H＜0.5mm 由于死时间tm包括在tr中，而实际的tm不参与柱内分配，所计算的n值增大，H很小，但与实际柱效能相差甚远。所以，提出把tm扣除，采用有效理论塔板数neff和有效塔板高Heff评价柱效能。 理论塔板高度（H） 塔板理论用热力学观点形象地描述了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程，导出流出曲线的数学模型，并成功地解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置，还提出了计算和评价柱效的参数。但由于它的某些基本假设并不完全符合柱内实际发生的分离过程，例如，纵向扩散不能解释造成谱带扩张的原因和影响板高的各种因素，也不能说明为什么在不同流速下可以测得不同的理论塔板数，这就限制了它的应用。 三、速率理论 1、塔板理论的不足 塔板理论虽然指出了理论板数n或理论板高度H对色谱柱效率的影响，但是没有指出影响塔板高度的因素，因此无法在理论指导下从实验上提高色谱柱的效率。 2、Van Deemter方程　　1956 年荷兰学者范弟姆特 等提出