色谱分析高效液相色谱精要.ppt

质子给予体 偶极相互作用 质子接受体 溶剂选择性分类三角形图 Xe Xd Xn 1 2 3 4 5 6 7 8 纯质子接受体 强偶极中性化合物 纯质子给予体 1 组：脂肪醚（纯质子接受体） 2 组：脂肪醇（质子接受-给予体） 3 组：吡啶衍生物、四氢呋喃（质子接受体，易极化） 4 组：乙二醇、苄醇、乙酸、甲酰胺（质子给予体） 5 组：二氯甲烷、二氯乙烷（大偶极距） 6 组：脂肪酮、酯、二氧六环、腈 7 组：芳烃、芳醚、硝基甲烷 8 组：氟代醇、氯仿、水（质子给予体） 质子给予体 偶极相互作用 质子接受体 反相色谱中的溶剂选择性 1 甲醇2 TFH3 4 5 乙腈6 7 水8 质子给予体 偶极相互作用 质子接受体 正相色谱中的溶剂选择性 醚 1 2 3 4 二氯乙烷 5 乙腈 6 7 8 CHCl3 主溶剂：己烷 1、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 基本原理：在液固色谱中，固定相是固体吸附剂，其表面存在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相分子在吸附剂表面上进行竞争吸附，这种作用也存在于不同溶质分子间，以及同一溶质分子的不同官能团之间。从而形成了不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡： 溶质分子与吸附剂的相互作用随官能团极性和数目的增加而增大；同时也与空间效应有关。 二、高效液相色谱法分类 固定相： 极性固体吸附剂： 如硅胶和硅酸镁为酸性吸附剂（pH=5）； 氧化铝和氧化镁为碱性吸附剂（pH=10-~12）， 非极性固体吸附剂： 多孔微粒活性炭； 多孔石墨化炭黑等。 主要参数：a 粒度； b 比表面积 较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 二、 分配色谱liquid- liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase）；反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 固定相:早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相:（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 正相的出峰顺序：极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱， 适于分离极性组分；反相出峰顺序：极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱；适于分离非极性组分。 化学键合固定相 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱； 化学键合固定相的特点: 键合反应： 硅醇基与有机硅烷反应 与多氯硅烷 与硅酸酯 用亚硫酰氯氯化后，与格氏试剂反应 固定相的性质： 固有的性质：表面积、颗粒度、孔径 氰基：与硅胶类似，极性小于硅胶，对酸、碱性化合物很少拖尾，对双键异构体分离具有选择性 氨基：呈碱性，氢键作用很强，对含羟基的化合物分离效果好，如甾类、强心苷类 流动相： 正相色谱：异丙醚、甲醇、二氯甲烷、氯仿 反相色谱：水、乙腈、甲醇和四氢呋喃 应用： 分离极性大的化合物 流动相常用：水或缓冲液与甲醇或乙腈的混合溶液 分离机制：被分离组分与固定相疏水作用力的差别 70-80%的样品是靠反相色谱完成的 三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 固定相：阴离子或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子树脂作固定相采用碱性水溶液 应用：离子及可离解的化合物氨基酸、核酸等。 离子交换色谱分离固定相 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团