《基因工程及其应用》分析报告.ppt

（三）基因操作的基本步骤 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 步骤一：目的基因的提取 方法：1、直接分离法 2、人工合成法 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体重组 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体结合 （三）基因操作的基本步骤 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 步骤三：目的基因导入受体细胞 目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 （三）基因操作的基本步骤 步骤四：目的基因的检测和表达 检测：根据受体细胞是否具有某些标记基因判断目的基因是否导入 表达：受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 基因工程 培育抗虫棉的简要过程： （一）基因工程的概念 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 什么叫基因工程？ 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的性状。 （一）基因工程的概念 （一）基因工程的概念 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ （二）基因操作的工具 基因的“剪刀”——限制性内切酶 基因的“针线”——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 基因的“剪刀”—限制性内切酶（限制酶） （二）基因操作的工具 存在：主要是微生物体内 特点：特异性 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 （二）基因操作的工具 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 基因的“剪刀”—限制性内切酶（限制酶） （二）基因操作的工具 限制酶 基因的“剪刀”—限制性内切酶（限制酶） 什么叫黏性末端？ （二）基因操作的工具 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 （二）基因操作的工具 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，如果让两者的黏性末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子。 外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？ （二）基因操作的工具 导入过程需要运输工具——基因的运载体。 运载体的作用有哪些？ 作用：作为运载工具，将外源基因转移到受体细胞中去。 作为运载体必须具备哪些条件？ （二）基因操作的工具 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗生素抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 基因的运载工具——运载体： （二）基因操作的工具 常用的运载体主要有两类： 1）质粒 2）噬菌体或某些动、植物病毒 （二）基因操作的工具 质粒是基因工程最常用的运载体。 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中核区以外的DNA分子。 绝大多数细菌质粒都是很小的环状DNA分子。 大肠杆菌的质粒： （二）基因操作的工具 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，常含有抗药基因。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C