12__基因工程的基本操作程序_(新人教选修3)分析报告.ppt

* * * 1．2 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 1．目的基因的概念：主要指编码____________的基因。 蛋白质 2．目的基因的获取途径： (1)从基因文库获取。 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段， 导入__________的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物 的不同的基因。 ②部分基因文库：只包含一种生物的一部分基因，如 cDNA 文库。 (2)利用________技术扩增。 (3)通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成。 受体菌 PCR 基因表达载体的构建——基因工程的核心 1．目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可在下一 代的细胞中________和发挥作用。 2．基因表达载体的组成：目的基因、__________、终止子、 标记基因等。 表达 启动子 将目的基因导入受体细胞 1．转化的概念：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞 内维持稳定和________的过程。 2．将目的基因导入植物细胞： (1)常用方法：________________法。 (2)其他方法：基因枪法、花粉管通道法等。 3．将目的基因导入动物细胞：常用的技术是显微注射技术。 4．将目的基因导入微生物细胞： 表达 农杆菌转化 目的基因的检测与鉴定 1．目的基因的检测：利用 DNA 分子杂交技术检测目的基 因的有无。 2．目的基因表达检测： (1)利用分子杂交技术检测目的基因的______________。 (2)利用________________检测目的基因的翻译。 3．个体生物学水平鉴定：抗虫或抗病的接种实验。 转录 抗原－抗体杂交 利用 PCR 技术扩增目的基因 1．PCR——聚合酶链式反应： (1)PCR：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合 成技术。 (2)目的：获取大量的目的基因。 (3)原理：双链 DNA 复制的原理。 (4)需要条件：模板 DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳定 DNA 聚合酶(Taq 酶)、缓冲溶液。 (5)方法：DNA 受热变性解旋为单链、冷却后引物与单链相 应的互补序列结合、在 DNA 聚合酶作用下延伸合成互补链。 (6)特点：指数形式扩增(约为 2n，其中 n 为扩增循环的次数)。 (7)过程：变性→复性→延伸(重复)。 形成整个 DNA 分子 在短时间内形成 大量的 DNA 片段 结果 细胞内含有 的 DNA 聚合酶 热稳定的 DNA 聚合酶(Taq 酶) 酶 主要在细胞核内 体外复制 场所 解旋酶催化 DNA 在高温下变性解旋 解旋方式 不 同 点 模板、酶等 条件 四种游离的脱氧核苷酸 原料 DNA 双链复制(碱基互补配对) 原理 相 同 点 DNA 复制 PCR 技术 2．DNA 复制与 PCR 技术的比较： 基因工程的核心——基因表达载体的构建 1．表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基 因。下图是表达载体的模式图： (1)启动子：一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的首 端。它是 RNA 聚合酶识别和结合的部位。 (2)终止子：一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的尾 端。它使转录在所需要的地方停止下来。 (3)标记基因：一种已知功能或已知序列的基因，起着特殊 标记的作用，用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因(目的基因 是否导入成功)。如抗生素基因或荧光基因等。 2．构建方法： (1)切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得 相同的黏性末端，利于重组质粒的构建。 (2)将切下的目的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入 适量的 DNA 连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒。 Ca2+处理细胞→感 受态细胞→重组表 达载体与感受态细 胞混合→感受态细 胞吸收 DNA 分子 将含有目的基因的 表达载体提纯→取 卵(受精卵)→显微 注射→受精卵发育 →获得具有新性状 的动物 将目的基因插入 Ti 质粒的 T—DNA 上→农杆菌→导 入植物细胞→整 合到受体细胞的 DNA→表达 转化过程 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 Ca2+ 处理法 显微注射技术 农杆菌转化法 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 受体种类 比较不同受体种类的目的基因的导入方法 真核生物的基因导入细菌细胞后，不能正常发挥功效的可 能原因有： (1)被细菌体内的限制性内切酶破坏。 (2)该基因指导合成的蛋白质不能在细菌体内正确修饰和 表达。 (3)细菌的 RNA 聚合酶不能识别真核基因的位点，致使不 能启动转录。 是否赋予了预 期抗性或蛋白 质活性 ①抗虫或抗病的接种 实验 ②基因工