Chapter酶重点分析.ppt

蛋白质的磷酸化和脱磷酸化 蛋白激酶 ATP ADP 蛋白质 蛋白质 P n 蛋白磷酸酶 nPi H2O 第一类：Ser/Thr型 第二类：Tyr型 第一类：Ser/Thr型 第二类：Tyr型 第三类：双重底物型 ?四. 酶催化反应机制的实例 —丝氨酸蛋白酶家族的作用机理 胰蛋白酶(trypsin) 胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin) 弹性蛋白酶（elastase) 凝血酶（thrombin) 血纤维蛋白溶酶（plasmin) 乙酰胆碱酯酶（acytalcholinesterase) 有共同的、涉及特有反应的Ser残基的作用机制。 二异丙苯氟磷酸（DIFP）是丝氨酸蛋白酶类的不可逆抑制剂，和Ser残基结合，使酶失活。 1、丝氨酸蛋白酶家族的底物专一性 ?★丝氨酸蛋白酶家族具有类似Ser-His-Asp的催化三联体。 His57 Asp102 Ser195 P143 图4-34 胰凝乳蛋白酶的催化三联体 电荷中继网： Ser195-His57-Asp102氢键体系。通过电荷中继网进行酸碱催化及共价催化。 P145 图4-36 在胰凝乳蛋白酶中催化三联体的作用 活性中心的底物结合部位不同，底物专一性也不同。 丝氨酸蛋白酶的活性中心位于酶分子表面凹陷的“小口袋”中，口袋的大小以及口袋内的微环境（疏水性、电荷性质）决定了丝氨酸蛋白酶的底物专一性。 胰蛋白酶： 口袋较大，底部有Asp，利于 Lys.、Arg结合，裂解碱性氨基酸残基羧基形成的肽键 胰凝乳蛋白酶 ： 口袋较大，主要由疏水氨基酸残基围成，开口较大（由两个Gly组成），因此需要底物有一个疏水基团（Phe、Tyr、Trp）定位。裂解芳香族氨基酸羧基形成的肽键 弹性蛋白酶： 口袋较浅，开口较小（由Val，Thr组成）只能让Ala等小分进入，裂解小的中性氨基酸残基羧基形成的肽键。 2. 胰凝乳蛋白酶的催化机制 ★丝氨酸蛋白酶家族具有类似Ser -His-Asp的催化三联体（电荷中继网）。 P143 图4-34 胰凝乳蛋白酶的催化三联体 胰凝乳蛋白酶分子中催化三联体 His57 Asp102 Ser195 Asp102 His57 Ser195 电荷中继网： Ser195—His57—Asp102氢键体系。通过电荷中继网进行酸碱催化及共价催化。 His57 Asp 102 Ser195 酶分子中的电荷中继网 没有底物时， Ser195—His57—Asp102形成一个氢键体系，His57是去质子化状态， Asp102的COO-通过氢键定位并固定His57。 Ser195 Asp 102 His57 底物 结合底物时： His57从Ser195接受一个质子，增加了Ser195羟基氧原子对底物的亲核攻击性， Asp102的COO-稳定过度态中His57的正电荷形式。 His57,Asp102,Ser195形成催化三联体（catalytic triad) 注意 一种酶催化的反应常常是多种催化机制的综合作用，这正是酶促反应具有高效率的重要原因。 酶催化作用机理 综上所述： 酶与底物结合时，酶及底物变形（诱导契合及张力学说）使二者相互适合，并依靠离子键、氢键、范德华力的作用和水的影响，结合成中间产物，在酶分子的非极性区域内，由于酶与底物的邻近、定向，使二者可以通过亲核催化、酸\碱催化或金属离子催化方式进行多元催化，从而大大降低反应所需的活化能，使酶促反应迅速迅速进行。 Section5 重要的酶类 及酶活性的调节 ★一、酶原的激活 体内合成出来的酶，有时不具有生物活性，经过蛋白水解酶专一作用后，构象发生变化，形成活性中心，变成有活性的酶。这个不具活性的酶蛋白称为酶原（proenzyme）。 由无活性的酶原转变成有活性的酶的过程称为酶原的激活。 蛋白质由无活性状态转变成活性状态是不可逆的。 实例：消化系统蛋白酶原的激活. 胰蛋白酶原 胰蛋白酶 六肽 肠激酶 活性中心 胰蛋白酶原的激活示意图 胰蛋白酶原 胰蛋白酶 六肽 肠激酶 胰蛋白酶对各种胰脏蛋白酶的激活作用 胰凝乳蛋白酶原 胰凝乳蛋白酶 弹性蛋白酶原 弹性蛋白酶 羧肽酶原 羧肽酶 酶原的激活过程就是酶活性部位形成的过程。 活性部位的形成伴随着构象的变化。 酶原的激活是生物体的一种调控方式。 ★二、酶的多种分子形式—同工酶 1.概念：存在于同一生物的不同组织或同一组织、同一细胞中，具有不同分子形式却能催化相同的化学反应的一组酶，称为同工酶（isoenzyme）。 同工酶技术：电泳，离子交换色谱鉴定 同工酶谱的差异是基因选择性表达的反映 乳酸脱