沙门氏菌实验标准操作程序.docVIP

沙门氏菌实验标准操作程序 岗位名称 检验员 执行人员 检验员 技能要求 掌握实验技能 监控人员 检验员 监控频率 实验过程 检验方法 对照试验 作业条件 在无菌室内操作 作业步骤 1、超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时，通风半小时后进入无菌室操作； 2、样品用75%酒精喷洒后放入传递窗，在无菌室操作台按顺序摆放后再用75%酒精均匀喷洒； 3、操作前手用75%酒精消毒，剪样前用酒精棉球擦拭样品表面； 4、前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL 缓冲蛋白胨水（BPW）的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH 值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH 至6.8±0.2。 无菌操作将样品转至500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。 如为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过15 min,或2～5 ℃不超过18 h 解冻。 5、增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，取1 mL，转种于10 mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液SC内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。同时，另取取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养。 6、分离 分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个BS 琼脂平板于36 ℃±1 ℃培养40 h～48 h和一个HE 琼脂平板于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h观察各个平板上生长的菌落, 各个平板上的菌落特征如下; BS 琼脂 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。 HE 琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。 XLD 琼脂 菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。 7、生化鉴定：采用商品化的试剂，按说明书操作。 试剂和培养基 1、缓冲蛋白胨水（BPW）：称取8.5g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，分装锥形瓶225mL，121℃高压灭菌15min备用。 2、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：称取23g亚硒酸盐胱氨酸增菌液溶于1000 mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，不要过度加热，定量分装备用，勿需高压灭菌。 3、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）：称取93.5g四硫磺酸钠煌绿增菌液溶于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌20min,临用前按每100ML加入碘液一支和P-73 0.1%煌绿一支，混匀后分装。现配先用，不宜久留。 4、亚硫酸铋琼脂（BS）：称取50.4g亚硫酸铋琼脂溶于1000 mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，冷却至55℃左右摇匀，倾注平板备用。 5、HE琼脂（HE）：称取75.7g HE琼脂溶于1000 mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，冷却至55℃左右摇匀，倾注平板备用。 6、生化鉴定试剂盒 设备和材料 微生物实验室常规灭菌及培养设备 恒温培养箱，冰箱，电炉，天平，均质器，灭菌枪头，移液枪，无菌培养皿，精密Ph试纸，接种针。 关键控制点 1、操作台的卫生； 2、操作时房间风扇的开关，超净台的风扇开微风。 3、操作过程中注意无菌操作，冲枪后连枪头带里面的液体一并打入垃圾桶，并用酒精棉球清洗移液器枪口，切勿将液体打回原试管或三角瓶中。 注意事项 1、操作台板不干净时，可先用酒精擦干净，再用湿洁净毛巾擦一遍，切忌在残留有酒精的情况下开紫外灯照射； 2、注意酒精灯的安全使用。 纠偏措施 1、当操作台板不干净时，注意保持台内清洁卫生，可先用酒精擦干净，再用湿洁净毛巾擦一遍； 2、切忌在残留有酒精的情况下开紫外灯照射，这样将使合成板开裂或变得模糊不清； 3、针对操作中可能带来的污染，操作时可通过开微风来尽量减少污染，操作时房间的风扇应不开或只开小风，以减少污染。 风险辨识 1、生产安全：（1）用电安全；（2）避免人长时间直接接触紫外灯照射； 2、食品安全：操作不规范影响实验结果。 3、环境风险：无 应急措施 1、强的用电安全意识；2、使用超净工作台前充分通风3、酒精灯着火时应立即用湿抹布扑灭。 检测中心