超级好的课件：动物细胞工程资料精要.pptVIP

科勒 米尔斯坦 荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。 ⑵如何诱导融合？ 加入聚乙二醇（PEG） ⑴如何得到B淋巴细胞？ 3.制备单克隆抗体的过程 ⑶细胞两两融合后，有哪些类型？ B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 ⑷如何筛选出杂交瘤细胞？ 单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。 ①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA而增殖。 通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。 ②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性孔 方法——抗原-抗体杂交法 在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 ⑻如何得到大量的单克隆抗体？ 体内培养 体外培养 单克隆抗体 ——化学性质单一、特异性强 ?抗体 ?抗原 ?应答 ?抗体的不纯性 动物细胞受到抗原刺激,引起免疫反应产生的球蛋白. 不是自己的而又能引起免疫应答反应的物质就是抗原. 一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种B细胞,作用于不同的B细胞后,会产生多种抗体, 这是多克隆的, 故不纯! 1.制备单克隆抗体的思路 抗原 B细胞 浆细胞 抗体 刺激 ?怎么才能得到纯的抗体? ?光纯还不行,还要大量.怎么办? ?但，有问题: ?找，什么细胞能无限繁殖呢? ?思路就出来了: 要想获单一的纯抗体,就必须从一个B细胞出发. 让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了. B细胞是不能无限繁殖的.怎么办? 癌! 只有癌细胞. 但它不能产生抗体. 癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B细胞能产生抗体,但不能大量繁殖.融合呀!只要将两个细胞融合即可互补. 2.技术思路的重点 杂交瘤细胞 HAT筛选? McAb 大量培养 PEG诱导细胞融合 免 疫 B 脾 矿物油 骨髓瘤 瘤 问题: 在培养体系中, 有4种细胞. B细胞、瘤细胞,和杂交细胞。 我们还是拿不到McAb,怎么办? 筛选！筛出杂交瘤细胞。怎么筛? 又是一个思路问题。 关键一步 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 4、单抗隆抗体的应用 ①作为诊断试剂 ②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ③用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量