病原第二十章教案分析.ppt

* * 第二十章 病毒感染的诊断与防治 一、标本的采集与送检 1. 不同病毒感染，不同病程，采取不同部位的标本 2.采集病人急性期标本，并注意无菌操作。 第一节 病毒感染的诊断 3.标本置于含有抗生素的50%甘油盐水 4.冷藏速送 二、病毒的分离培养与鉴定 病毒的分离培养 动物接种 鸡胚培养 组织细胞培养 原代细胞 二倍体细胞 传代细胞 动物接种 鸡胚培养 鸡胚接种 细胞培养 病毒的鉴定 细胞形态学改变 1.致细胞病变效应 (CPE) 2.多核巨细胞 3.包涵体 致细胞病变效应 致细胞病变效应 正常细胞 细胞死亡 细胞变圆 细胞融合 多核巨细胞与包涵体 狂犬病毒包涵体 红细胞吸附 、干扰现象、细胞培养液pH值的改变 病毒的定量测定 50%致死量（LD50）或50%感染量（ID50）测定 空斑形成单位(PFU)测定 空斑形成 三．病毒感染的血清学诊断 标本采集 早期和恢复期双份血清 急性期单份血清IgM的测定 双份血清的IgG 的测定 血清学诊断常用方法 中和试验 补体结合试验、 血凝抑制试验 凝胶免疫扩散试验 补体结合试验 抗原-抗体 ＋ 补体 ＋ 绵羊红细胞-溶血素 不溶血 溶血 血凝试验和血凝抑制试验 血凝试验 血凝素＋鸡红细胞－→红细胞凝集 血凝抑制试验 血凝素－抗体＋鸡红细胞－→红细胞不凝集 四、病毒感染的快速诊断 形态学检查 普通光学显微镜 用于检查病变组织或脱落细胞中特征性病毒包涵体 电镜 常用技术有负染技术、免疫电镜技术、超薄切片电镜技术等。 免疫荧光技术 (immunofluorescence,IF) 酶免疫技术 (enzyme immunoassay,EIA) 可检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。 检测病毒抗原 核酸杂交技术 斑点杂交、细胞内原位杂交 、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。 聚合酶链反应（PCR ） 应用较多的是荧光基因探针杂交定量PCR技术，又称定量实时荧光PCR。 生物芯片技术（DNA芯片、生物芯片） 检测病毒核酸 第二节 病毒感染的防治 一、病毒感染的预防 人工主动免疫 减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗等 脊髓灰质炎疫苗 减毒活疫苗 人二倍体，Vero细胞 麻疹疫苗 减毒活疫苗 鸡胚细胞 流行性腮腺炎疫苗 减毒活疫苗 鸡胚细胞 风疹疫苗 减毒活疫苗 人二倍体细胞 甲型肝炎疫苗 减毒活疫苗 人二倍体细胞 人用狂犬病疫苗 灭活疫苗 地鼠肾细胞 乙型脑炎疫苗 灭活疫苗 地鼠肾细胞 森林脑炎疫苗 灭活疫苗 地鼠肾细胞 乙型肝炎疫苗 基因工程疫苗 酵母菌表达 疫苗名称 疫苗种类 培养细胞种类 表20-1 我国常用的病毒疫苗