第六细菌的遗传分析精要.ppt

主要内容 细菌的细胞和基因组(自学) 大肠杆菌的突变型及筛选 细菌的接合与染色体作图 中断杂交与重组作图 F`因子与性导 细菌的转化与转导作图 大肠杆菌的突变类型 突变型筛选（自学） 一、大肠杆菌的突变类型 1、合成代谢功能的突变型——营养缺陷型 合成代谢功能（anabolic function） 细菌接合现象的发现 F因子及其转移 细菌重组的特点 一、细菌接合现象的发现 菌株A：met- bio- thr+ leu+ thi+ 菌株B：met+ bio+ thr- leu- thi- 二、F因子及其转移 细菌主要是无性繁殖，直到1946年人们才注意到不同品系大肠杆菌间可以杂交，并进行了基因重组，从而首次发现了大肠杆菌也有“性别”。 2、F因子/性因子/致育因子 F因子：环状DNA，含6×104个bp。 大肠杆菌供体中含有，而受体无。 由原点、致育基因、配对区三个部分组成。 环状F因子的模式图 组成F因子各部分的功能 原点：是转移的起点。 配对区：此处与大肠杆菌DNA多处核苷酸序列相对应（即同源序列），故可通过交换而使F因子整合到大肠杆菌DNA上。 致育基因：其上一些基因编码生成F菌毛的蛋白质，即供体菌细胞表面的管状结构，F菌毛与受体菌细胞表面的受体相结合，在两个细胞间形成接合管（或细胞质桥）。 3、F+、F-与Hfr F+：细胞质中具有F因子的大肠杆菌（供体） F-：细胞质中没有F因子的大肠杆菌（受体） F因子及其在杂交中的行为 Hfr（high frequence recombination） 4、附加体 象F因子既可独立存在于染色体之外作为一个独立的复制子，也可整合到大肠杆菌染色体中作为大肠杆菌复制子的一部分的遗传物质（遗传因子），称为附加体。 三、细菌重组的特点及机制 细菌重组的特点 细菌同源重组的分子基础 （一）细菌重组的特点 细菌重组不同于真核生物的完整二倍体的重组。 Hfr 与F－接合常会形成部分二倍体 部分二倍体：这种含有一个亲体F-全部基因组和另一亲体部分基因组的合子叫部分合子（半合子）/部分二倍体。 细菌的重组就是指F-的DNA（内基因子）与Hfr的部分DNA （外基因子）之间的重组。 内、外基因子的交换情况 单交换 ? 部分二倍性线状体 双交换 ? 重组体＋线性片断 偶数次交换结果：只产生一种重组体，而无另一相应的重组体。 （二）细菌同源重组的分子基础 RecBCD识别chi序列引发重组 RecA催化单链同化 Ruv系统解离Holiday连接点 1、RecBCD识别chi序列引发重组 保守的8碱基非对称序列 大肠杆菌DNA每5-10Kb自然出现一次 被recBCD编码的酶所识别 刺激重组——重组热点 2） RecBCD酶的功能 ① 能降解DNA的核酸酶（核酸外切酶Ⅴ） ② 解旋酶活性 ③ ATP酶活性 目标：提供一条含游离3’端的单链区域 （ RecA可以作用的底物） 2、 RecA催化单链同化 ① 具有蛋白酶活性 ② 在单链DNA和ATP存在的条件下启动DNA单链和与之互补的双链分子进行碱基配对。 单链同化： RecA可使一条DNA单链置换一条双链DNA分子中同源链的反应。 3、Ruv系统解离Holiday连接点 RuvA：识别Holliday连接点的结构 RuvB：具ATP酶的活性，为分支迁移提供动力。 RuvC：具有核酸内切酶活性，可特异识别Holliday 连接点。 一、中断杂交实验原理 　Hfr细胞和F-细胞杂交，基因从Hfr细胞按次序转入F-细胞，可根据基因进入F-细胞的时间和次序制作基因图谱。 实验材料 Hfr：thr+ leu+ azis tons lac+ gal+ strs 　 F-：thr- leu- azir tonr lac- gal- str r 　 实验方法-中断杂交实验 两品系在液体培养基里，通气混合培养，定时取样，猛烈搅拌以中断杂交，释稀菌液，在含Str的基本培养基上培养。 二、中断杂交作图 实验结果说明： Hfr 的DNA从一端开始，以线性方式逐段进入F－，这一端叫原点或O点。 O点 ? azis ? tons ? lac＋? gal＋ 时间单位法 以转移时间单位（每分钟）作为基因间距单位，可作出Hfr 的“染色体”上的基因分布图（基因连锁图） 。 假如让Hfr ×F－　杂交持续2h后中断杂交，发现一些F－ ? F＋。 这说明Hfr的全部基因转移到F－内，排列到最后的F因子才进入F－，使F－ ? F＋ 。 几个Hfr菌株的线性连锁群的产生 一、F′因子与F′菌株 带有部分细菌染色体的F因子称F′因子。 特点：