分子生物学研究法要点分析.docVIP

分子生物学研究法 5．1 重组DNA技术发展史上的重大事件 2 5．2 DNA操作技术 5 5．2．1核酸的凝胶电泳 5 5．2．2核酸的分子杂交 6 5．2．3 细菌转化 7 5．2．4核苷酸序列分析 7 5．2．5 基因扩增 10 5．2．6 DNA与蛋白质相互作用研究 11 5．3 基因克隆的主要载体系统 12 5，3．1 质粒DNA及其分离纯化 12 5．3．2 重要的大肠杆菌质粒载体 13 5．3．3 λ噬菌体载体 15 5．3．4柯斯质粒载体 17 5．3．5 pBluescript噬菌粒载体 17 5．4 基因的分离与鉴定 18 5．4．1 DNA片段的产生与分离 18 5．4．2 重组体DNA分子的构建 18 5．4．3 cDNA基因克隆 19 5．4．4克隆基因的分离 20  分子生物学研究之所以从20世纪中叶开始得到高速发展，其中最主要的原因之一是现代分子生物学研究方法，特别是基因操作和基因工程技术的进步。基因操作主要包括DNA分子的切割与连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析以及基因的人工合成、定点突变和PCR扩增等，是分子生物学研究的核心技术。基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达。因此，基因工程技术其实是核酸操作