-食品微生物学实验指导手册要点分析.docVIP

《》实验指导手册 目 录 实验一 环境中微生物的检测 1 实验二 细菌的革兰氏染色 3 实验三 细菌的芽孢染色 5 实验四 霉菌水浸标本片的制备与观察 7 实验五 牛奶中菌落总数的测定技术 8 实验六 食品中金黄色葡萄球菌的测定 11 实验七 国标法测定食品中的大肠菌群 14 附录1 大肠菌群最可能数（MPN）检索表 16 实验一 环境中微生物的检测 一、实验目的 1．学习环境中微生物的检测方法。 2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。 二、实验原理 自然环境中普遍存在着各种各样的微生物，检测微生物的存在，简单的方法是应用一般营养琼脂，使微生物细胞或其孢子落到营养琼脂表面，在适宜温度下即可大量繁殖，形成肉眼可见的群体——菌落。不同微生物各自具有不同的菌落形态。 三、实验仪器与材料 1．培养基：营养琼脂平板（NA）成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121，15min高压灭菌备用。马铃薯葡萄糖琼脂平板（PDA）成分：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖（或蔗糖）20g，琼脂20g，水1000mL。制法：pH值自然。将马铃薯去皮、洗净、切成小块，称取200g加入1000mL蒸馏水，煮沸20min，用纱布过滤，滤液补足水至1000mL，再加入糖和琼脂，溶化后分装，121灭菌20min。另外，用少量乙醇溶解0.1g氯霉素，加入1000mL培养基中，分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。2．仪器用具：恒温培养箱、记号笔 四、实验步骤 1取营养琼脂、PDA平板各一个，在皿盖上用记号笔标明班级、姓名及编号。 2分别打开皿盖，做如下处理： （1）置实验台上，于空气中暴露5分钟。 （2）置地面上，脚击地板，于振动的空气中暴露5分钟。 （3）用自己的手指分别触摸平板（轻按即可）。 （4）呼出气体于平板上。 3把经以上处理的平板分别盖上皿盖，将培养皿倒置恒温培养箱内培养，营养琼脂平板置于37℃培养箱中培养48h，PDA平板置于28℃培养箱中培养2-3天后检查结果。 五、思考题 观察平板上有无微生物群体——菌落出现，并比较不同微生物种类所形成的菌落在形态上的差别。PDA平板出现菌落较少或尚未长出时，置28℃恒温下继续培养2天观察。 （1）观察NA、PDA平板上微生物的颜色、透明度、光泽度、形态、凸起。 （2）比较NA、PDA平板上微生物的种类、数量。 （3）分别计算不同平板及不同处理下各平板上出现的菌落数。 实验二 细菌的革兰氏染色 一、实验目的 1. 学习并初步掌握革兰氏染色法。 2. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验原理 革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。由于革兰氏阳性菌细胞壁含肽聚糖多、脂类少，且是紧密的立体网状结构，用乙醇洗脱不出染料，故为蓝紫色；革兰氏阴性菌细胞壁含肽聚糖少、脂类多，且呈疏松的片层结构，乙醇使脂类溶解将染料洗脱，因此可被复染而呈现红色。 三、实验仪器与材料 1. 菌种: 牛肉膏蛋白胨琼脂培养18～20h的枯草芽孢杆菌、牛肉膏蛋白胨琼脂培养24 h的大肠埃希氏菌 2. 试剂: 草酸铵结晶紫染色液、路哥氏碘液、95%乙醇、番红染色液 草酸铵结晶紫染色液：将2.5g结晶紫研细后，加入25mL 95%酒精使之溶解，配成A液，将1.0g草酸铵溶于100mL蒸馏水配成B液，两液混合即成。 路哥氏碘液：碘1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300.0mL。先将碘化钾溶解在一小部分的蒸馏水中，再将碘溶解在碘化钾溶液中，然后加入其余的蒸馏水即成。 番红染色液：番红2.0g，蒸馏水100.0mL。用蒸馏水溶解即成2%番红染色液。 3. 仪器或其它用具: 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、吸水纸、生理盐水等。 四、实验步骤 1、涂片：取一块干净的载玻片，并在其中央滴一小滴生理盐水。接种环在酒精灯上杀菌后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混匀后并涂布成一均匀的薄层。涂布面一般以直径1cm大小范围为宜。 2、干燥：自然晾干或在火焰上烘干。 3、固定：置于酒精灯火焰上加热固定（迅速通过火焰三次）。 4、染色 ⑴初染：将结晶紫滴于涂片上染色1min，用蒸馏水冲洗。 ⑵媒染：滴加路哥氏碘液，媒染1min，用蒸馏水冲洗。 ⑶脱色：用95%乙醇边滴边洗25s，或在涂片处加1～2滴95%酒精浸泡25s后，立即用水冲洗。 ⑷复染：用1～2滴番红复染2min，用蒸馏水冲洗。 5、干燥：用吸水纸将多余的水分吸干。 6、镜检：先低倍镜，后高倍镜，最后用油镜观察。 五、实验结果 将观察结果记入下表 菌名 菌体颜色 细胞形态 G+或G-