基因工程(经典版)分析.ppt

第一节 遗传物质基础的概述 一、理论基础 不同生物体来源的基因具有相同的物质基础。 从原核生物到真核生物，从动物甚至是人，承载和传递遗传信息的物质，除少数病毒是rna以为，绝大多数都是dna。 基因工程的基础是dna。体外dna重组技术是基本内容和关键技术。 随着生命科学的不断进步，丰富的遗传资源可以有目的地按照人们的意愿进行设计，通过体外dna的重组和转基因技术进一步改造。 打破了不同物种之间的界限，可以使原核生物和真核生物，动物或者人之间，进行基因相互重组与转移。 能合成水母荧光蛋白的荧光兔 这是一种科研人员从特殊水母中提取的绿色荧光蛋白基因，将该基因转染到培养的兔子成纤维细胞中，再挑选出发绿色荧光的转基因体细胞，将其细胞核移植到成熟的去核兔子卵母细胞中，最终构成了转基因胚胎。胚胎经过手术，移植入“代孕兔”体内。经过30天的发育，就通过剖腹产获得了这只转基因克隆兔。? 二、基因工程操作的基本技术路线 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因工程基本技术路线 p35 从基因文库中获取目的基因 1.什么叫基因文库？ 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （cDNA文库） 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 杂交探针 1是一小段单链DNA片段（十几到几百个碱基），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）标记成为探针。（分为cDNA探针，基因组DNA探针等。） 2当将探针与样品杂交时，探针和与其互补的核酸（DNA或RNA）序列通过氢键紧密相连，随后，未被杂交的多余探针被洗去。最后，根据探针的种类，可进行放射自显影、萤光显微镜、酶联放大等方法来判断样品中是否，或者何位置含有被测序列（即与探针互补的序列）。 三、DNA的结构和特性 DNA可分为一级结构、二级结构和三级结构。 一级结构：是DNA分子中核苷酸的排列顺序； 二级结构：是两条DNA单链形成的双螺旋结构。 （一）DNA的一级结构与功能 是DNA分子中核苷酸的排列顺序； 脱氧核苷酸是由脱氧核糖、碱基和磷酸基团组成的化合物。 磷酸二酯键 5‘-磷酸基团和另一个脱氧核苷酸的3’-羟基之间可以形成磷酸二酯键，把两个脱氧核苷酸连接在一起。 A G P 5? P T P G P C P T P OH 3? 书写方法 5? pApCpTpGpCpT-OH 3? 5? A C T G C T 3? DNA一级结构的功能： DNA链中的每条单链都是由四种碱基组合成变化无穷的排列方式，大多数生物的遗传信息都是以特定的核苷酸排列顺序贮存在DNA分子中，如果核苷酸排列顺序变化，他的遗传信息也跟着随之改变，也就是说，一级结构中贮存了生物的遗传信息。 （二）DNA的二级结构与功能 是两条DNA单链形成的双螺旋结构。 两条反向平行的脱氧核苷酸链围绕一个共同的中心轴盘绕成双螺旋构型。 DNA的变性与复性 DNA的变性： 由于双链DNA主要依靠配对碱基之间的氢键维持的，当双链DNA处于较高温度时，会因氢键断开而解链成单链DNA。 DNA的复性：当变性的dna被逐渐冷却时，分开的两条单链会重新结合到一起，成为双链dna，此过程为复性。 DNA复性的问题 短链DNA容易精确复性，而长链DNA的复性比较困难，容易出现碱基错误配对。 主要表现在： 复性条件下，只要是碱基互补，即使不是同一个DNA分子的两条单链，都可以复性，甚至是DNA与RNA之间同样可以互相配对，成为双链杂种分子。 DNA分子主要携带两类遗传信息，一类是有功能活性的DNA序列所携带的信息，这些信息能够通过转录成RNA（mRNA、tRNA、rRNA等）的序列。 另一类信息为调控信息，是特定的DNA片段，后章节会讲。 四、RNA的结构与功能 （一）信使RNA 即mRNA。 RNA分子中有一类可以作为蛋白质生物合成的模版，称为信使RNA。约占RNA总数的1%--5%。