基因工程的原理分析.ppt

作为基因工程运载体的条件 3、将目的基因导入受体细胞 方法： 将目的基因导入植物细胞： 农杆菌转化法（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 4、目的基因的检测与鉴定 鉴定：（个体水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 4、目的基因的检测与鉴定 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 DNA连接酶的作用过程 返回 目的基因与质粒的连接 返回 谢谢！再见 第一节 基因工程的原理 普通玫瑰 蓝色妖姬 思考：蓝色妖姬如何培育的？ “蓝色妖姬”最早来自荷兰是一种加工花卉。它是用一种对人体无害的染色剂和助染剂调合成着色剂，等白玫瑰（或白月季）快到花期时，开始用染料浇灌花卉，让花像吸水一样，将色剂吸入进行染色。 据花卉专家介绍，目前世界上极少有自然生长的蓝色玫瑰花，现在市场上出售的“蓝色妖姬”都是人工染色后的产物。比较正规的“蓝色妖姬”是在花卉的成长期开始染色，颜色能均匀地附着在花瓣上，看上去比较自然；部分商贩直接将普通的白玫瑰花采摘后染成蓝色，颜色不自然，也容易掉色。 2008年11月1日闭幕的东京国际花卉博览会上，全球首批真正的蓝玫瑰首次在公众面前亮相。这种蓝玫瑰是转基因玫瑰，被植入三色紫罗兰所含一种能刺激蓝色素产生的基因，花瓣因而自然呈现蓝色。 一、基因工程所需的工具 限制性内切酶 1.来源： 大肠杆菌等微生物 2.特点： 识别特异的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割磷酸二酯键。 3.结果： 产生粘性末端 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 限制性内切酶作用过程 点击播放 DNA连接酶 1.连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 问题 用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？ 2.连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。 DNA连接酶的作用过程 点击播放 DNA复制 思考：比较 DNA连接酶和DNA聚酶？ DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的单链核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键,需要摸板。DNA连接酶是连接两个双链DNA片段的末端，形成磷酸二酯键,不需要摸板。 　　要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。常用的载体是质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 三、基因进入受体细胞的载体—“分子运输车” ①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 ②具多种限制酶切点，以便与外源基因连接。 ③具有某些标记基因，便于进行筛选。 ④载体是安全的，不能对受体细胞有害。 ⑤载体DNA分子大小应合适，以便提取和在体外进行操作。 二、基因工程 概念： 按照人们的意愿，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行重新组合，然后转入另一种生物的体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。 意义： 能够打破生物种属的界限，在分子水平上定向改造生物的遗传特性。 二、基因工程的操作程序 目的基因的获得 重组载体的构建 重组载体的转化和筛选 目的基因的表达和鉴定 探究活动：尝试DNA的提取与鉴定 实验原理： DAN不溶于酒精溶液，但细胞中的许多其他物质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以提取出含杂质较少的DNA。 DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验程序： 材料准备(新鲜菠菜和体积分数为95%的酒精溶液，冷冻处理)→研磨（冰上操作）→过滤→离心→加冷酒精→鉴定（沸水浴） 课堂反馈 1.某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy）基因a,通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。这一过程涉及 （ ） A.目的基因进入受体细胞后，可随着马铃薯的DNA分子的复制而复制，传给子代细胞 B.基因a导入成功后，将抑制细胞原有的新陈代谢，开辟新的代谢途径 C.细菌的DNA分子较小，可直接作为目的基因，导入受体中不需要整合到马铃薯的DNA分子中 D.目的基因来自细菌，可以不需要运载体直接导入受体细胞 A 2.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是 （ ） A.限制酶和DNA连接酶 B.限制酶和DNA水解酶 C.限制酶和RNA聚合酶