基因工程的主要技术及其原理分析.ppt

三 Northern杂交 总RNA或mRNA→甲醛变性琼脂糖电泳→印迹转膜→预杂交→杂交（变性探针） →洗膜→放射自显影或显色 四 菌落或噬菌斑杂交 菌落原位杂交示意图 五 Western杂交 PVDF膜 目的蛋白质 抗目的蛋白的第一抗体 羊抗家兔IgG的第二抗体 偶联的碱性磷酸酶 磷酸化生色体系 显色 第四节 聚合酶链式反应技术 一 PCR技术原理 PCR( Polymerase Chain Reaction):一种在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下利用DNA聚合酶的酶促反应。 DNA的体外复制 高温变性: 92-96℃ 低温退火: 37-72℃ 适温延伸: 72℃ （一） PCR技术的基本过程 5’ 3’ 3’ 5’ 变性、退火、延伸 循环n次 一 次 循 环 两 次 循 环 变性 5’ 3’ 3’ 5’ 退火 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 延伸 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ n次循环后双链DNA在 理论上的最高值为2n （二） 平台期与平台效应 平台效应形成与下列因素有关： 平台效应：PCR 反应经过一定数量的循环后，随着产物的指数积累趋于饱和，DNA片段不再呈指数积累，而是进人线性增长或静止期。 （1）引物、dNTP快速掺入底物中，其浓度降低，掺入速度减慢； （2）随产物增加，酶与模板的比例下降； （3）非特异性产物或引物二聚体与反应物竞