基因组RNA的复制吕远生工A分析.ppt

转录物输出到细胞质 剪接完全的转录物与宿主细胞的剪接好的转录物使用同样的机制离开细胞核，但没有剪接的或仅发生单一剪接反应的依然含有多重剪接信号的mRNA需要一种含有细胞核输出信号（NES）的Rev蛋白。Rev与没有剪接的RNA上的发夹结构—Rev反应元件（RRE）结合，其NES被CRM1识别。 剪接不完全的逆转录病毒mRNA离开细胞核的机制 翻译及翻译后加工 逆转录病毒使用多聚蛋白质提高其基因组的编码能力 所有的逆转录病毒都可以产生三种多聚蛋白质即多聚GAG、多聚GAG-POL和多聚ENV，剪接过的或非剪接过的mRNA在从细胞核运输到细胞质后都可以作为模板进行翻译。其中9kb转录物被正常翻译成多聚GAG或经移框翻译出多聚GAG-POL融合蛋白。这两种多聚蛋白在病毒组装过程中被多聚GAG-POL上的蛋白酶结构域切割成各种蛋白质单体。其中多聚GAG可产生MA、CA和NC等几种病毒内部结构蛋白。 一种剪接过的mRNA（含有env基因）被翻译成gp160多聚蛋白，并进入内质网进行糖基化修饰，在高尔基体被宿主细胞的蛋白酶剪接成gp120和gp41，将来分别成为SU和TM。 多聚GAG-POL除了产生MA、CA和NC以外，还能产生蛋白酶、逆转录酶和整合酶。多聚GAG-POL的量要远远小于多聚GAG的量，因为作为对酶分子的需求显然小于对结构蛋白的需求。 新病毒装配和出芽释放 GAG与GAG-POL的内部核心自发装配成“颗粒”； 两个拷贝的9kb长的基因组RNA随着GAG之中的NC部分与病毒RNA上的包装序列结合进入颗粒之中。 GAG和GAG-POL上的Myr-MA部分指导复合物，到达插有gp120-gp41复合物的细胞膜上。 颗粒与内部的gp41结构域结合，并开始出芽。 在出芽期间或出芽以后，GAG 和GAG-POL 被病毒的蛋白酶切割，成为各种单体，其中蛋白酶、逆转录酶和整合酶与基因组RNA相连，其它结构蛋白构成衣壳包裹基因组RNA。在出芽过程中，含有gp120-gp41的细胞膜包被在病毒颗粒的最外面。在颗粒释放以后，GAG和GAG-POL继续切割。 病毒蛋白酶虽然不是病毒装配所必需的，但却是病毒成熟和获得感染性所必需的。现在，HIV蛋白酶的抑制剂已成为抗艾滋病鸡尾酒疗法中的标准成分。 艾滋病毒完整的生活史 艾滋病的混合疗法或鸡尾酒疗法 各种逆转录元件 某些DNA病毒生活史中的逆转录现象 某些DNA病毒，例如花椰菜镶嵌病毒（CaMV）、乙型肝炎病毒（HBV）和其它一些嗜肝DNA病毒，尽管遗传物质是DNA，但其生活史中也有从RNA到DNA的逆转录过程。这些DNA病毒被称为泛反转录病毒 乙型肝炎病毒的生活史 细菌内发现的逆转录事件 逆转录也发现在粘球菌、大肠杆菌和一些革兰氏阳性杆菌（如根瘤菌）之中。这些细菌体内存在一种奇怪的核酸被称为msDNA。该核酸是通过特殊的逆转录反应形成的。 msDNA由1个RNA分子和1个DNA分子通过2′-5′磷酸二酯键相连，它们由同一段基因组DNA编码，在它们基因组DNA序列的下游是1个RT的ORF，编码合成msDNA所需要的逆转录酶。含有足够的遗传信息以合成msDNA的DNA单位被称为逆转子 msDNA的形成 组织，如脑 裂解细胞，纯化总mRNA mRNA 寡聚 dT 逆转录酶 cDNA 逆转录酶的应用 核糖核酸酶H或碱处理 DNA聚合酶I S1 核酸酶 Ds-cDNA * Enhancers may upstream or downstream. LTRs have promotors and enhancers 基因组RNA的复制 提纲 依赖于RNA的RNA合成 双链RNA病毒的RNA复制 单链RNA病毒的RNA复制 以DNA为中间物的RNA复制 逆转录病毒的RNA复制 逆转座子 端聚酶催化的逆转录反应 某些DNA病毒生活史中的逆转录现象 依赖于RNA的RNA合成 RdRP主要由病毒基因组编码，有的还需要宿主细胞编码的辅助蛋白 合成的方向总是5′→3′ 绝大多数在模板的一端从头启动合成，少数需要合成引物 属于易错、高突变合成 对放线菌素D不敏感，但对核糖核酸酶敏感 复制的场所绝大多数在宿主细胞的细胞质，少数在细胞核 正链RNA和负链RNA基因组的复制 逆转录病毒的发现 上世纪60年代，Howard Temin观察到某些RNA病毒的复制和增殖受到DNA复制和转录的抑制剂——放线菌素D的抑制，于是他大胆地推测到这些病毒的生活史中有DNA中间物的存在或者有从RNA到DNA的逆转录过程。 1970年，Temin和David Baltimore 各自从RNA肿瘤病毒中纯化到催化以RNA为模板合成DNA的逆转录酶，为逆转录现象的存在提供了最直接的证据。Termin和Baltimore的发现使