爱爱医资源细胞转染的基本原理和相关技术分析报告.ppt

六）克隆基因的表达 　表达体系的建立 　　　表达载体的构建 　　　受体细胞的建立 　　　表达产物的分离纯化 　　１、原核表达体系 　　２、真核表达体系 按生长方式:2型 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 粘附:是大多数有机体细胞在体内 生存和生长发育的基本存在方式 含义 两方面 结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 有机体的绝大多数细胞必须 粘附于一固相表面 才能生存和生长。 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。 粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞 类型 细胞在体内、外的粘附方式：存在差异 体内：粘附是全方位 外形具有复杂的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 外形一般与体内时明显不同 按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为几大类型 分类 根据形态大致的不同，主要2类： 上皮细胞型 成纤维细胞型 其它，不定型 名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于-- 来源：来源于外胚层，内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物 消化道，乳腺，肺泡 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞 扁平，不规则多角形，中有圆形核 生长特点 易相连成片 相靠—紧密相连—成薄层— 铺石状 生长时呈膜状移动 很少脱离细胞群而单个活动 体外培养细胞类型（1）——上皮细胞型 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织 如：真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮 形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起 中有卵圆形核 生长特点 排列成放射状，漩涡状 并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而 单独行动 游离的单独的成纤维样细胞， 常有几个伸长的细胞突起 体外培养细胞类型（2）——成纤维细胞型 1. 与体内同名的细胞不完全相同 如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源 自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但 发展趋向不同 2. 培养细胞的形态不稳定 条件改变，细胞形态可有变化 培养细胞形态不稳定血清 Hela 高血清 低血清 成纤维细胞样 上皮样细胞 pH Hela 太酸或太碱 标准pH 成纤维细胞样 上皮样细胞 细胞密度 3T3 低密度 高密度 成纤维细胞样 上皮样细胞 生长状态改变 悬浮或贴附 悬浮 贴附 圆形 成纤维或上皮样 转化与否 未转化 转化后 成纤维样 可成上皮样 概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源 自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能 特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形，单个或小细胞团 优点  生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可