【发酵工程】第二章发酵工业菌种.分析报告.ppt

本章内容 第一节、发酵工业菌种概述 第二节、发酵工业菌种的分离筛选 第三节、发酵工业菌种的鉴定 第四节、发酵工业菌种改良 第五节、发酵工业菌种保藏 自然界微生物种类相当繁多，目前，人类所知道的微生物种类不到其总数的10%，而被利用的还不到1%。 未培养微生物 发酵工业微生物 可培养微生物 菌种是发酵工业的灵魂，它是决定发酵产品是否具有产业化价值和商业化价值的关键因素。 菌种早期从自然界筛选、分离得到，后采用常规及现代育种技术选育。 1、细菌（单细胞原核微生物） 醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌 乳酸杆菌 枯草杆菌 丙酮丁醇梭菌 大肠杆菌 谷氨酸棒状杆菌 2、放线菌（单细胞原核微生物） 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 3、酵母菌（单细胞真核微生物） 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属 汉逊酵母属 4、霉菌（单、多细胞真核微生物） 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 未培养微生物 定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物，其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为99％。 研究方法 模拟自然培养法: 原位培养、培养条件优化、 单细胞操作 宏基因组分析法：利用其基因资源。 第二节、发酵工业菌种的分离筛选 一、菌种筛选的总趋势与要求 二、分离筛选原理与技术 三、应用举例 1、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 2. 菌种筛选的总趋势 野生菌→变异菌 自然选育→代谢控制育种 诱发基因突变→基因重组的定向育种 3. 菌种选择的要求 二、分离筛选原理与技术 1. 筛选的指导思想 2. 分离筛选工作在实际中应用的几个方面 3. 新种分离筛选原理与技术 1.筛选的两种指导思想 先分离纯化，再结合工艺要求进行筛选。 分离纯化同时富于筛选条件，一步得出所需菌株。 结果有两种可能： 获得适于工业发酵菌株。 只获得选育所需的出发菌株。 2.分离筛选工作在实际中应用的几个方面 从被污染的生产及科研用菌中分离目的菌； 生产中长期使用的菌种的定期分离筛选 ； 从各种育种方法处理的微生物材料中分离筛选适于工业目的的优良菌株 ； 从保藏机构获取菌种，进行分离筛选。 （经济性、指导性） 从已知菌种和大自然中分离新菌株 寻找新的发酵产品的产生菌； 寻找老产品的新的优良菌株。 设计筛选方案时必须考虑两个要点： 选择性 灵敏度 制定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 预处理：提高菌种分离的效率。 富集培养：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 菌种的筛选：通过常规生产性能测定，进一步筛选产物合成能力较高的菌株。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 菌种保藏 （1）含微生物样品的采集 样本采集时所需的工具通常有无菌刮铲、土样采集器、镊子、解剖刀、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。 4）采样的注意事项 1、采样时应尽可能保持相对无菌； 2、所采集的样本必须具有某种代表性； 3、采好的样必须完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等； 4、应充分考虑采样的季节性和时间因素，因为真 正的原地菌群的出现可能是短暂的； 5、采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。这是因为一旦采样结束，试样中的微生物群体就脱离了原来的生态环境，其内部生态环境就会发生变化，微生物群体之间就会出现消长。 5）土样采集方法 森林、旱地及草地可先掘洞，由土壤下层向上层顺序采集； 水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入圆筒采集。如果层次要求不严格，可取离地面5～15cm处的土。将采集到的土样盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中。 在采集植物根际土样时，一般方法是自土壤中慢慢拔出植物根，在大量无菌水中浸渍约20min，洗去粘附在根上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根部残留的土，这部分上即为根际土样。 6）植物体采集方法 在采集叶面时，一般是用灭菌的剪刀、打孔器、安全刀片等，由几片新鲜叶片的同一部位切取一小块，并注意不要损伤周围边缘。 选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和在一片叶上的取样部位。 采集植物根及根系时，方