《生物工程专业》.docxVIP

PAGE  生物工程专业 综合大实验指导书 集 美 大 学 生 物 工 程 学 院 2013．03 第一组： 重组蛋白大肠杆菌表达菌株的构建 及其诱导表达 指导老师：林静瑜，杜翠红，朱艳冰，刘静雯 实验内容 1. 目的基因（鸡白细胞介素-2基因）的PCR扩增、表达载体（pGEX-4T-3）的质粒提取、琼脂糖凝胶电泳检测及PCR片段回收。（林静瑜） 2. 采用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞。（杜翠红） 3. 表达载体和PCR片段的双酶切、DNA片段的回收及表达载体与目的基因的连接，采用热激法将表达载体与目的基因的连接液转化大肠杆菌感受态细胞。（朱艳冰） 4. 阳性转化子的筛选、诱导表达及SDS-聚丙酰胺凝胶电泳检测。（刘静雯） 实验目的 通过本实验，让学生熟悉重组基因的克隆与表达的一般流程，掌握基因工程的基本操作技术和方法，掌握琼脂糖凝胶电泳和SDS-聚丙酰胺凝胶电???操作步骤，从而加深学生对有关基因工程和电泳技术等理论知识的理解，提高学生的动手能力和科研意识，为进入毕业论文阶段做准备。 实验原理 （一）目的基因的PCR扩增、质粒提取、琼脂糖凝胶电泳检测及PCR片段回收 利用PCR扩增鸡IL-2基因，琼脂糖凝胶电泳检测后进行PCR产物的纯化。利用碱裂解法提取pGEX-4-T质粒，并进行琼脂糖凝胶电泳检测。 （二）采用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 所谓感