选修DNA重组技术的基本工具技术方案.ppt

、2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 3、DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ DNA聚合酶的作用过程（DNA复制） C A G T T G A C DNA聚合酶：连接单链DNA， 把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段上。 C A G T T G A C DNA连接酶连接过程 在两DNA片断之间形成磷酸二脂键 3、DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 双链 在两DNA片断之间形成磷酸二脂键 单链 将单个核苷酸连接到DNA片段上形成磷酸二脂键 三、分子运输车—基因进入受体细胞的载体 1、载体的作用： 将目的基因导入到受体细胞中 2、载体的种类： 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 认识常用的载体——质粒 质粒是基因工程常用的载体，一种裸露的、结构简单、独立于染色体或细菌拟核之外，能自我复制的小型环状双链DNA分子，对宿主细胞没有影响，主要存在于细菌和酵母菌体内。其中最常用的是大肠杆菌质粒。 三、分子运输车—基因进入受体细胞的载体 1、载体的作用： 将目的基因导入到受体细胞中 2、载体的种类： 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 3、作为载体的必要条件 (1) 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； (2) 具有一种至多种限制酶的切点，以便与目的基因连接，每一种限制酶为单一切点； (3) 具有某些特殊标记基因，便于进行鉴定和选择； (4) 对受体细胞无害。 限制酶切割位点 有标记基因的存在，将来可用含氨苄青霉素的培养基鉴定和筛选。 能复制并带着插入的目的基因一起复制 3、作为载体的必要条件 (1) 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； (2) 具有一种至多种限制酶的切点，以便与目的基因连接，每一种限制酶为单一切点； (3) 具有某些特殊标记基因，便于进行鉴定和选择； (4) 对受体细胞无害。 1、基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以 ， 然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 2、DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀“── “分子缝合针”── “分子运输车“── 限制酶 DNA连接酶 基因进入受体 细胞的载体 3、限制酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ， 并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 原核生物中分离纯化出来 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 4、 DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 连接黏性末端 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 连接黏性末端和平末端 4、基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 作为载体的条件： 在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒都是在 质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 过的。 能自我复制；有切割位点； 有特殊标记基因；对受体细胞无害。 基础上进行 1、20世纪70年代，创立了一种新兴生物技术——基因工程，实施该工程的最终目的是[ ] A . 定向提取生物体的DNA分子 B . 定向地对DNA分子进行人工剪切 C . 在生物体外对DNA分子进行改造 D . 定向地改造成生物的遗传性状 2、下列关于限制酶的说法不正确的是[ ] A．限制酶广泛存在于动植物体中，微生物中很少分布 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割