抗核抗体概要.pptVIP

抗核抗体 Autoantibody to Nuclear Antigen,ANA 青岛大学医学院附属医院 刘斌 抗核抗体 自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体 ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱 ANA新概念：抗核酸（Nucleic acid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗体的总称 某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富 ANA检测的意义 有助于疾病的诊断，如抗Sm是SLE标记抗体；抗ScL-70 是SD的标记抗体，抗Jo-1是PM/DM的标记抗体 观察疾病活动度和治疗反应 研究发病机理 荧光显微镜下ANA的染色型别 均质型：与抗组蛋白和抗DNA有关 斑点型：与抗ENA有关 周边型：与抗dsDNA有关 核仁型：4-6sRNA 着丝点型：在SD及CREST中出现 抗核抗体谱的组成 1.不能用盐水提取的成分：dS-DNA， SS- DNA ，组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4 2.可用盐水提取的成分（ENA）：U1RNP，Sm，SSA，SSB，Jo-1，Scl-70，PM-1，KU，HI，PCNA，rRNP ，Sa…… 3.5SRNA，ACA，抗核仁抗体…… 抗双链DNA抗体（短膜虫免疫荧光法 ?1:5） 抗组蛋白抗体（酶联免疫吸附法?X?2SD) 系统性红斑狼疮 50% 其他结缔组织病 23-30% 服异烟肼12月以上 53% 服苯妥因钠6月以上 18% 服他巴唑6个月 0 ?活动期SLE 90.2%阳性  抗H1 H2A H2B H2A-H2B H3 H4 系统性红斑狼疮 ++ + +++ +++ + + 长期服异烟肼 ++ ++ ++ ++ ++ +++ 类风湿关节炎 + + + + + + SLE以IgG型抗组蛋白抗体为主，而长期服烟肼及RA病人以IgM型为主 抗ENA抗体的检测 ENA又称为可提取性核抗原，是核物质中一类蛋白的总称。这类核蛋白不含有DNA，组蛋白，可以用盐水进行提取，所以被称为可提取性核抗原。 ENA抗原可以从多种组织中获得，各种来源的ENA没有种属间的差异，但是有明显的组织不均一性。 抗ENA抗体检测方法 1.对流免疫电泳（CIE） 2.免疫双扩散（ID） 3.免疫印迹法（IBT） 4.点免疫印迹法（IDT） 5.ELISA 免疫双扩散（ID） 抗原和抗体分子量在20万道尔顿以下者在琼脂糖制成的固相载体中可自由扩散。由于它们相对应的极性基团，带电的不同状态，在电解质的参与下而互相吸附结合形成肉眼可见的一系列沉淀线。ID法用已知的抗体作为阳性对照，以确认待测的血清中是否有相应的抗体存在。 免疫印迹法（IBT） IBT法的原理也是利用蛋白质的电泳现象将经过 SDS 分离的蛋白从凝胶上转移到硝酸纤维素膜上，使待测的抗体与附着于固相支持体上的靶蛋白所呈现的抗原表位 发生特异性反应，以达到检测与鉴定的目的。多肽的迁移率和多肽的分子量正相关。不同的凝胶介质有不同的线性分离范围。 可与抗ENA抗体发生特异性结合的多肽抗原表位 Sm 28/29，13.5KD U1RNP 73，32，17.5KD SSA 52，60KD SSB 45，47，48KD rRNP 38，16.5，15KD Jo-1 55KD ScL-70 86，70KD IBT法的特点 将经过 SDS 分离的蛋白质精确到近似定量的转印到硝酸纤维素膜上，并且保持其生物学活性不变 ，将抗ENA抗体的检测提高到分子多肽的水平，同时提高了检测的敏感性和特异性。 免疫印迹法也存在着许多难以避免的问题。 IBT方法 中常遇到的问题 1.市售试剂盒不能检测60KDSSA；有材料统计约8.8%的抗SSA抗体漏检，而通常是IBT法52KD阴性，ID法阳性。其中70%为系统性红斑狼疮。单纯52KD阳性者只有少数病例为CTD，大多数为NCTD，52KD虽然出现的几率较高但特异性较差。 2.U1RNP的抗原表位是最具多态性的。在IB法检测中，除了73，32，17.5三个抗原位点以外，28/29KD是经常伴随U1RNP出现的抗原表位。据统计约有69.6%的U1RNP与28/29KD同时出现，和双扩散的符合率达到76.4%，证明28/29KD不但是Sm的抗原决定簇，也是U1RNP一个重要的抗原决定簇。 常见结缔组织病的抗核抗体的阳性率 ANA dsDNA Hi