第三章植物组织与器官培养技术分析.ppt

第 3 章 植物组织与器官培养 1 植物组织培养 2 植物胚胎培养 3 毛状根培养 植物组织培养存在的问题 1）培养比较困难的植物的组织培养缺乏研究。 2）细胞全能性表达和激素作用机理等未深入研究。 3）效率偏低、操作烦琐、培养结果难以确定等技术问题还没很好解决。 4）组培种苗工厂化生产成本过高，投入资金大。 5）生物反应器设备、技术上面临许多问题。 思考题 传统途径存在的问题？为什么要采用组织培养？ 什么是组织培养？原理是什么？ 优点与应用有哪些？ 植物组织培养的基本步骤有哪些？ 植物组织培养的培养基一般包含哪些成分？ 复习思考题： 培养基的成分包括哪几类？各有何作用？ 在培养基成分中什么决定着外植体发育方向？ 抗生素的作用是什么？ 配制MS培养基时，琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？ ？ 组织 分裂 分化 细胞 　分裂 已分化组织细胞 脱分化 分裂 再分化 器官 植株 * * * * * * 1934年李继侗等首先发现，银杏胚乳提取物对银杏胚的培养有促进生长作用。 * * 3.2 植物胚胎培养 对植物胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。 成熟胚培养 幼胚培养 胚乳培养 子房胚珠的培养 植物胚培养的类型 成熟胚：一般是指子叶期后至发育完全的胚，较易成功。 幼胚：指子叶期以前的具胚结构的幼小胚，培养技术难度较成熟胚大。 3.2.1 成熟胚的培养 ---以玉米成熟胚培养为例 1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6hr。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼苗 玉米成熟胚的培养 3.2.1 成熟胚的培养 3.2.2原胚(幼胚)的培养 （1） 培养方法 ① 取材 取材时期 多为球形胚至鱼雷形胚 ② 幼胚剥离 一定要注意保湿，且操作要迅速。 胚剥离时应带胚柄，胚柄促进幼胚离体生长。 ③ 培养条件的控制 剥离出来的幼胚要立即接种到培养基上进行培养。 开花授粉后12-15d取幼胚。 取材时间 无机氮： 渗透压： 复杂的天然提取物： 活性炭： 包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐； 蔗糖，8%-10%， 不同发育期，渗透压不一样，初期高。 因为自然条件下，原胚被一层高渗液体包围着 椰乳有促进幼胚生长和分化的作用 吸附有毒物质 （2） 原胚培养的条件 胚培养的意义 用于胚的挽救，促使发育不良或中途败育的胚发育成熟 打破种子休眠, 抢救储藏过久或储藏不当的种子。 克服珠心胚的干扰 (多胚性植物－柑橘、芒果、蒲桃、仙人掌） 诱导胚状体及胚性愈伤组织 种子生活力的快速测定 3.2 植物胚胎培养 成熟胚培养 幼胚培养 胚乳培养 子房胚珠的培养 胚乳：X＝3（2♀极核＋1♂精子） 有些植物在胚发育过程中把胚乳消耗尽（豆科和葫芦科） 有些植物，胚乳在成熟种子中存在，贮存大量营养物质（禾谷类，椰子，咖啡） 3.2.3 胚乳培养 胚乳培养：将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 胚乳发育时期 发育早期的胚乳: 接种不方便，愈伤组织的诱导频率很低。 旺盛生长期的胚乳: 离体条件下最易诱导产生愈伤组织。 接近成熟或完全成熟的胚乳: 愈伤组织诱导频率很低。 胚乳培养的应用 1）胚乳培养可得到三倍体植株，产生无籽果实。或加倍形成六倍体植株进行育种。 2）胚乳培养可得到倍性不同的愈伤组织，可分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 3.2 植物胚胎培养 成熟胚培养 幼胚培养 胚乳培养 子房胚珠的培养 子房壁 果皮 珠被 种皮 胚乳 胚 受精极核 受精卵 种子 果实 子房的结构 （1） 子房培养 定义：子房培养是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 类型 授粉子房的培养 未授粉子房的培养 性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）----胚状体或愈伤组织----雌性单倍体植株； 体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤组织----二倍体植株； 未受粉子房： 受粉子房：获得成熟果实或者具有生活力的种子 外植体取材时期：在开花前后适宜时期取子房或幼花 黄瓜子房组织经脱分化形成胚性愈伤组织 胚珠培养类型： 1)受精胚珠的培养 2)未受精胚珠的培养 示胚珠的位置 倒生胚珠 （2） 胚珠培养 （2）胚珠的发育： 受精胚珠：一是形成种子；二是形成愈伤组织 未受精胚珠：形成单倍体植株。 （3） 子房胚珠的培养应用 挽救杂种胚，促进原胚继续生长，使杂种幼胚发育成熟； 成功：四季桔、柑、