第五章亲和层析技术分析.ppt

第三节　亲和层析的操作过程 一、基质的活化 对基质进行一定的化学处理 （一）多糖基质的活化：溴化氰活化 、环氧乙烷基活化 （二） 聚丙烯酰胺的活化：甲酰胺基的修饰 （三） 多孔玻璃珠的活化 ：硅烷化试剂与玻璃反应生成烷基胺－玻璃 溴化氰活化 环氧乙烷基活化 聚丙烯酰胺的活化 二、间隔臂分子（手臂） 空间位阻效应 加入一段有机分子，使基质上的配体离开基质的骨架向外扩展伸长。 三、配基偶联的方法 （一）碳二亚胺缩合法 （二）酸酐法 （三）叠氮化法 （四）重氮化法 碳二亚胺缩合法 酸酐法 用ω-氨基烷基琼脂糖(或丙烯酰肼衍生物)与1%的琥珀酸酐水溶液作用，生成琥珀酰氨烷基琼脂糖衍生物(含羧基的载体)。 叠氮化法 重氮化法 ω–氨基烷基琼脂糖衍生物，在pH9.3的硼酸钠(或三乙胺)和40%(V/V)N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，与对硝基苯叠氮化合物在室温反应1 h，制得对硝基苯甲酰胺烷基琼脂糖衍生物。 产品先依次用50%DMF、25%DMF和水充分洗涤，接着用0.1 mol/L连二亚硫酸钠在40~50℃还原40 min，最后在0℃、0.5 mol/L HCl溶液中用0.1 mol/L亚硝酸钠处理7 min，制得重氮盐衍生物。 将所需配基与该琼脂糖重氮衍生物偶联反应，便可制得亲和层析柱。 四、用于固定化配基的凝胶衍生物 Sepharose