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用磁镊技术对生物单分子进行操纵
摘要
相对于传统的生物单分子操纵技术如AFM、微针等受设备影响大,操纵能力有限等缺点,磁镊通过外加磁场操纵处于其中的可磁化微粒进而操纵与微粒连接的生物分子,具有更好的操纵和测量能力、更简单的装置、无损伤等优势。
引言
生物单分子操纵技术是上世纪90年代以来发展起来的,单分子研究技术有如光镊、磁镊、玻璃微管和分子梳、原子力显微镜、扫描隧道显微镜等,再加上单分子荧光技术。 这些单分子DNA的操纵技术各有自己的优缺点。比如,对原子力显微镜技术来说,它是使用原子力显微镜的悬臂操纵DNA ,其可以准确测量的力不小于10 pN,而许多单分子研究要求10pN以下的精确度,比如对分子马达的研究;玻璃微针技术是使用商业拉针仪拉出比原子力显微镜悬臂弹性系数更小的微针尖,通过修饰微针尖,连接DNA,但是这样一个微针只能连接一根DNA,不能重复使用,实验很耗费时间;光镊是利用聚焦激光束产生辐射压力而形成的光学陷阱,可以使处在陷阱中的微粒受力,此方法要求使用高功率的激光器,价格昂贵。同时,强的激光束斑还可能对所研究的DNA分子造成损伤。STM的基本原理是基于量子“隧道效应”当针尖和试样面间距离足够小时(0.4nm)在针尖和试样面间施加一偏置电压,,在偏置电压作用下,针尖和试样面之间将产生强大的电场
(109-1010V/m)。试样面上的吸附电子在强电场作用下,经过蒸发被移动或提取,在试样面上留下空穴,从而实现单原子的移动和操纵。同样,吸附在针尖上的原子也可在强电场作用下,经过蒸发而沉积到试样面上,完成单原子的放置,此方法对材料要求较高,必须是导体或者半导体。
相对于传统的单分子操纵技术——微针、原子力显微术、光镊等存在作用力小且不易测量、实验环境受限制、对生物样品有损害等诸多不足。作为克服这些不足而出现的磁镊技术,具有作用力大、应用范围广、无损耗、稳定等优势,很好得解决了这些问题。磁镊提供的作用力在0.1—100pN内可调,既可从分子外部进行操作,也可以深入细胞内部,还可对溶液体系中的鲜活样品进行操作。
最早应用磁镊的是Crick与Hughes,他们用磁镊在生物物理实验中操纵磁性物体研究细胞质的粘滞性;随后Yag用磁镊研究了细胞质的力学性质。近年来,磁镊技术更是迅速发展,已在用来研究单个DNA分子和动力蛋白的微机械与传输性质。
磁镊的性能
从结构和原理上,磁镊包括三部分:超顺磁小球、磁场以及显微装置,梯度分布的磁场对处于其中的可磁化小球施力,通过这种施力操纵进而影响生物样品,即将DNA 的一端连在小球或玻璃表面上,另一端连上一个超顺磁性小球(简称磁球),另加一个磁场吸引住磁球,改变外磁场就可以拉动或转动磁球,从而拉伸或扭转DNA分子。单分子磁镊又可以分为纵向磁镊和横向磁镊,其中纵向磁镊方法是通过小球像的光晕的变化来测量磁球与载玻片表 面的距离, 即单分子DNA的拉伸长度。这种方法实验时样品池溶液可更换,具有较高的实验效率,但是它的缺点是对显微镜显像的质量要求很高;而文献报道的近场横向磁镊装置能够直观方便地观察并检测单个DNA分子的伸展长度,同时具有较高的精确度。它的缺点是实验时样品池内的溶液不能更换, 而且一次实验只能操纵一个单根DNA,效率比较低。
磁镊系统的性能是由系统各部分综合决定的。磁镊系统主要由磁路系统、显微成像系统以及数据采集和处理系统等部分组成。另外还有用来保障系统稳定运行的温控、防震等辅助装置。磁路系统用来产生稳定梯度分布的磁场,包括组合电磁线圈、电源以及相应的机械和温度控制等;显微成像系统包括倒置显微镜和探测图像的CCD系统等;数据采集和处理则分别由相应的程序完成。
磁镊的测力原理:
在磁球饱和磁化的情况下, 磁球受力大小与磁场梯度成正比. 为了获得足够大的磁力, 要保证磁铁
前端梯度足够大,磁铁前端要做成锥状,同时要保证磁场梯度在磁球的位置近似于只有一个方向,从而使得生物大分子只在单一方向上受力。磁球受力由下式给出:
(1)
式中,m为磁矩,B为磁场强度。实验过程中单分子受力的测量是由磁球的布朗运动给出,公式为
(2)
式中, kB 为波尔兹曼常数,T 为绝对温度, Z 为单分子的平均长度, 为磁球布朗运动 x 方向的方差. 在设备中,Z 和 可以通过图像分析直接得到.
当DNA受力小于10pN时,DNA伸长与受力由Worm-Like-Chain(WLC)模型给出, 当DNA的伸长与DNA 的原始长度比值大于0.5时, WLC模型公式可以近似为
(3)
其中,
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