NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究(黄东)课件.pptVIP

11、实时荧光定量PCR检测小鼠脊髓NR2B、SP、 c-fos和GFAP基因的表达 接种术后第18天，实时荧光定量PCR检测各组小鼠脊髓NR2B、SP、GFAP、c-fos的相对表达量 注：图示中NR2B和c-fos组均放大100倍 　　　　　　 图5：Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓NR2B的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 * 图6：Western Blot检测接种术后第14天 小鼠脊髓p-ERK的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 3.1 接种术后第14天，检测NR2B和p-ERK蛋白表达 NR2B GAPDH p-ERK GAPDH * 12、Western Blot检测接种术后第14天小鼠脊髓的NR2B，p-ERK ，p-p38和GFAP蛋白表达 Western Blot检测接种术后第14天 小鼠脊髓p-p38的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 * Western Blot检测接种术后第14天 小鼠脊髓GFAP的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 * 13、接种术后第14天，检测p-p38和GFAP蛋白表达 GAPDH GFAP GAPDH Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓NR2B的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓p-ERK的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 接种术后第18天，检测NR2B和p-ERK蛋白表达 14、 Western Blot检测接种术后第18天小鼠脊髓的NR2B，p-ERK ，p-p38和GFAP蛋白表达 NR2B GAPDH p-ERK GAPDH * * Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓p-p38的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 Western Blot检测接种术后第18天 小鼠脊髓GFAP的表达 A: 正常组；B: 癌痛组；C: 干扰组；D: 干扰对照组 接种术后第18天，检测p-p38和GFAP蛋白表达 p-p38 GAPDH GFAP GAPDH * * 1）癌痛小鼠的MAPK通路中相应信号分子p-ERK、p-p38、c-fos表达明显上调；而NR2B的沉默可以下调MAPK通路中相应信号分子p-ERK、p-p38、c-fos表达； 2）GFAP在癌痛小鼠中高表达，同时NR2B的调控可以影响GFAP的表达； 解除Mg2+ 对NMDA受体离子通道的阻断作用 结合到突触后膜上配体门控离子型谷氨酸受体—AMPA受体，Na+内流 NMDA受体激活，Ca2+内流增加 激活ERK，p38 c-fos转录因子激活 NR2B表达 伤害性信号传入脊髓背角，释放大量谷氨酸 SP表达 神经元下游相关基因表达变化 神经胶质细胞GFAP表达 结合到胶质细胞上AMPA受体 激活ERK，p38 直接导致胶质细胞内的GFAP大量表达 导致癌痛 我们推测癌痛产生的可能机制 结 论 1. C57BL/6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞能成功制备小鼠骨癌痛新模型，此模型与人类骨癌痛具有相似性； 2. NR2B在小鼠骨癌痛模型中呈高表达，且同一癌痛模型中观察到NR2B在L4-L6段脊髓和前扣带回同时高表达，提示在癌痛的产生和维持中不仅激活了脊髓低位中枢，而且有脑部中枢参与； 3. 本研究初次发现NR2B在癌痛模型的L4-6段脊髓前角细胞表达呈强阳性，为下一步研究提供了新的思路； 结 论 4. PEI/NR2B-siRNA复合物能特异性的使骨癌痛小鼠脊髓 NR2B的表达明显下调；其表达下调与小鼠疼痛行为学减轻相一致，进一步证明NR2B在骨癌痛发生过程中起重要作用； 5. MAPK信号转导通路（ERK通路和p38通路）在骨癌痛小鼠模型中被激活；NR2B参与了MAPK信号通路介导的骨癌痛的中枢敏化； 6. NR2B参与介导的骨癌痛可能与GFAP的过表达相关，其机制有待进一步研究。 NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究 中南大学湘雅三医院 黄 东 教授 ※ 目前，全球癌症患者的数量呈 ＊ 骨癌