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第五章细胞与细胞工程 §5.1 细胞基本概念及基本技术 一、细胞的基本概念 1. 细胞是生命活动的基本单位 3. 细胞的类别 二、细胞内酶活性的调节 代谢与酶 代谢调节的基本类型 反馈阻遏 转录水平酶量的调节，产生效应慢，影响一系列酶 反馈抑制 酶活性水平调节，产生效应快，一般仅对一种酶起作用 共价修饰 酶分子中的某些基团，在其它酶的催化下，可以共价结合或脱去，引起酶分子构象的改变，使其活性得到调节，这种方式称为酶的共价修饰（Covalent moldification ）。 目前已知有六种修饰方式： 磷酸化/去磷酸化，乙酰化/去乙酰化 腺苷酰化/去腺苷酰化，尿苷酰化/去尿苷酰化 甲基化/去甲基化，氧化（S-S）/还原(2SH) 酶级联系统调控示意图 三、细胞培养技术 实验室基本组成 准备室 无菌间 操作间 培养室 分析室 …… 无菌技术 防止微生物污染的技术 培养用品清洗 玻璃器皿清洗： 浸泡→刷洗→浸酸→冲洗 胶塞清洗 2% NaOH煮沸10-20分钟→流水冲洗→1% HCL浸泡30分钟→流水冲洗→蒸馏水煮沸10-20分钟→晾干 塑料制品清洗 2% NaOH浸泡过夜→流水冲洗→5% HCL浸泡30分钟→流水冲洗→蒸馏水冲洗→晾干 金属器械清洗 自来水或蒸馏水洗净→酒精棉球擦拭→晾干 杀菌的3个等级：灭菌、消毒和防腐 灭菌：彻底杀菌。杀死一切微生物及它们的芽孢或孢子。 消毒：非彻底杀菌。能杀死物体上的有害微生物，但不能杀死全部芽孢。 防腐：抑菌过程。防止或抑制微生物的生长繁殖。 灭菌方法： 物理灭菌法： 紫外线消毒 湿热灭菌 高压蒸汽灭菌 常压蒸汽灭菌：100℃，6-8小时 间歇灭菌法：100 ℃，20-30分钟→温室培养24小时→重复2次 过滤除菌 化学消毒 抗生素消毒 常见污染原因 培养基、接种材料本身消毒不彻底 不按操作规程操作 实验人员或工具带菌 细菌污染 培养材料附近出现黏液状物体及浑浊的水迹痕迹、起泡沫发酵等情况；接种后1-2天出现 真菌污染 培养基上长霉，黑、白、黄等颜色；接种后3-5天出现 多为接种室内空气污染或操作过程中瓶塞附近孢子落入 四、细胞融合技术 细胞融合 使用人工方法将2个或2个以上的细胞合并形成1个细胞的技术 细胞融合的分类 细胞融合的原理 §5.2 动植物细胞的培养特征及 营养要求 一、动植物细胞的培养特征 二、动植物细胞的营养要求 （一）植物细胞的营养要求 （二）动物细胞的营养要求 主要成分 对于营养要求非常苛刻 氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅酶、激素、生长因子等。 * * 一切有机体都由细胞构成，细胞是构成有机体的基本单位 细胞具有独立的、有序的自控代谢体系，细胞是代谢与功能的基本单位 细胞是有机体生长与发育的基础 细胞是遗传的基本单位，具有遗传的全能性 没有细胞就没有完整的生命 Five genetically identical cloned sheep 羊发育早期的胚胎→5份→植入“代孕妈妈”子宫中 At an early stage the cells are able to adjust and form an entire animal; later in development the cells become progressively stricted and can no longer do so. 1996年7月,克隆羊多莉诞生 1997年2月，英国《自然》杂志全文刊登罗斯林研究所的实验结果 2003年2月，患多种慢性疾病，包括风湿、早衰以及逐渐恶化的肺病，安乐死 供体细胞：乳腺细胞 受体细胞：未受精的卵细胞，去核 融合，分裂、分化，形成“胚胎细胞” 植入“代孕妈妈”子宫中 2. 细胞的基本共性 具有相似的化学组成 具有相同的脂-蛋白体系生物膜结构 具有DNA和RNA的遗传装置 具有蛋白质合成的机器——核糖体 以一分为二的方式进行增殖 基本元素：C、H、O、N、P、S、Ca、K、Fe、Na、Cl、Mg 生物小分子：核苷酸、氨基酸、脂肪酸、单糖 生物（大）分子：核酸、蛋白质、脂质、多糖 复合分子：核蛋白、脂蛋白、糖蛋白、糖脂等 20世纪60年代，细胞生物学家H.Ris 细胞 原核细胞 真核细胞 原核生物 真核生物 原核细胞特点： 遗传信息量小，环状DNA作为载体 没有以膜为基础的具有专门结构和功能的细胞器和细胞核 进化地位 结构复杂度 遗传装置类型 主要生命活动方式 包括：支原体、衣原体、立克次体、细菌、放线菌、蓝藻等 肺炎支原体 衣原体 立克次氏体 大肠杆菌 酶活性的调节 细胞间的信息联系主要由两个系统进行：一个是神经系统；一个是内分泌系统（激素） 最基本的代谢调节 酶活性调节 酶含量