基因的重组与转移概述.ppt

B 农杆菌介导的遗传转化： 转化方法研究及宿主范围的拓展; 转化机制研究; 大片段的DNA转移; 植株原位转化（in planta transformation). 转化方法研究及宿主范围的拓展 农杆菌有严格的宿主范围，它比较易浸染双子叶植物，对单子叶植物不敏感。但近年来有一定进展，农杆菌在一定条件下同样可以感染单子叶植物。利用农杆菌介导分别从水稻、小麦、玉米、甘蔗等获得了转基因植株。下面几个因素使农杆菌介导转化单子叶植物获得进展： 使用酚类物质诱导vir基因表达。 首先发现AS（乙酰丁香酮）和HO-AS能诱导vir基因表达，后来发现邻苯二酚40多类酚类物质对virG有诱导活性。多种酚类复合物比单一酚类物质的诱导活性更高。此外，较低的pH、低于280C的温度、较高的渗透压、一些糖类等均能诱导vir基因表达。 广寄主范围农杆菌菌株的筛选。 主要是在农杆菌菌株的筛选、质粒载体的构建及菌株与载体的互作等方面进行了大量工作。 使用单子叶植物特异启动子（如Actin,Ubiquione,and α-Amylase的启动子代替35S启动子）和利用分生组织与农杆菌共培养。 目前已清楚决定农杆菌与玉米的亲和性的是农杆菌的virA基因，对该基因进行改造可望提高农杆菌对单子叶植物的亲和性。生长和分裂旺盛的胚性愈伤组织被认为是获得单子叶植