基因工程的常规技术概述.ppt

第三章 基因工程常规技术（P 32—52） 电泳技术 杂交技术 转化技术 PCR 扩增技术 文库构建技术 测序技术 第一节 凝胶电泳技术 电 泳（electrophoresis) 带电物质在电场中向相反电极移动的现象 1、原　理 DNA分子的磷酸基团在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下DNA分子向正极泳动 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用琼脂糖的分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。因而就可依据DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。 2、琼脂糖凝胶电泳的影响因素 1）样品DNA分子大小和分子构型 2）琼脂糖浓度 p33 取决于所分离DNA片段的大小 3）缓冲液 TAE、TBE 4）电泳条件 电压：3-5V/cm 时间：30-60min 二、聚丙烯酰胺凝胶电泳 以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，其分辨率高于琼脂糖凝胶电泳，用于核酸和蛋白质的分离、纯化及检测。分离小片段DNA(1—1000bp)效果较好,其分辩力极高。 聚丙烯酰胺由丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺聚合而成。 三、脉冲电场凝胶电泳（PF