病理科优化制片及染色流程技术分析.docVIP

病理科优化石蜡切片 1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。2、 蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为3～8度，以免刀刃面将组织刮坏。3、 修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。4、 切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。常规切片～μm。5、 切下的蜡片相连成带状。待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端刀。6、 将蜡片较光滑的一面朝下置于温水中（通常捞片水温在42），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。7、 附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。玻片一端应留有1/3的位置贴号码标签用。将蜡片附贴在另外2/3的中心位置。8、 切片放入6烤箱中约0分钟烤片，以免发生脱片。为了防止脱片可以选用挂胶片比较常用的挂胶片有明胶片，APES胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。1、 选取适当的新鲜组织块，放在冷冻托上，放入冷冻切片机中冻透。2、 修块、切片。冷冻切片通常厚6μm并把切片贴于载玻片上。3、 在酒精灯上轻烤片刻，放入固定液中分钟。4、 然后快速HE染色（可在酒精灯上加热进行，以缩短时间）。5、 封片、贴标签后，送诊断室。常见问题及问题 原因 解决方法 组织发脆 脱水、透明、浸蜡时间过长、温度过高，或与组织本身质地有关 在切片时，边切边用嘴向蜡片吹气，可能会好些 切片卷起 刀不锋利，或刀锋在另一面，或刀角度过大，切片太厚等等更换切片刀口，调整刀角度在8到10之间，调整切片厚度在3-5微米左右 蜡片弯曲刀锋不均，切片刀未磨直，切片刀与蜡块不平行 将刀安放平整，调整蜡块切面与刀架平行 厚薄不均刀、刀座及蜡块未夹紧，组织太硬，或切片机主轴太向前，或切片机已磨损夹紧刀架，并拧紧相关螺丝，摆放切片机主轴在合适位置，找相关专业人员对切片机进行维护，调整组织脱水程序以对组织合理脱水 切片出现裂痕刀有缺口，石蜡内有杂质，组织内有钙化、骨片或有线结, 也可能会有棉纸纤维等 更换切片刀口，将石蜡过滤后使用，清除蜡块中的异物，对于骨或者钙化物先脱钙后再切片 切片不连片，切不下片，切片很厚，或者切片后蜡块发白，内陷组织脱水不佳 先将蜡块溶解，取出组织，放入加热水浴的丙酮内（80），30～60分钟，再进行透明浸蜡包埋切片 HE染色切好的片子应在60~70左右的烤箱中烘烤30分钟以上才能进行染色。HE染色手工程序： 脱蜡1、二甲苯（AR） 5分钟 2、二甲苯（AR） 5分钟 3、100%酒精（AR、无水乙醇） 1分钟 4、100%酒精（AR、无水乙醇） 1分钟 5、95%酒精（工业酒精或医用酒精） 1分钟 6、80%酒精（工业酒精或医用酒精） 1分钟 7、自来水浸洗 1分钟 以上3~7称为进水过程。 染色 1、苏木素染液 6分钟 2、水冼 1分钟 3、0.5-1%盐酸酒精分化 片刻（上下三颜色由蓝变红） 4、自来水冲冼 15分钟以上 （然后95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精，此步可免）5、1%伊红酒精浸染 1~2分钟 6、水冼 1分钟 脱水、透明、封固 95%酒精 1分钟 95%酒精 1分钟 100%酒精 1分钟 100%酒精 1分钟 石炭酸二甲苯(1:3) 10秒钟 以上称为脱水。 二甲苯 透明 1分钟 取出后用中性树胶（上海产，预先用二甲苯溶解，粘稠度适中即可）封固。 染色结果： 核：蓝黑色 胞浆：不同程度的粉红色 肌纤维：较深的粉红色 胶元纤维：淡红色 红细胞：桔红色。染色注意事项 配制染液和其他溶液时，要根据需要和染液