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第二节 黄酮类成分分析 无交叉共轭——颜色浅 有交叉共轭——颜色稍深 花色苷及苷元 异黄酮、查耳酮、橙酮和黄烷类 盐酸-镁粉反应为负反应 三、定性鉴别 （一）显色反应 中药的甲醇或乙醇粗提取物常显酱红色，在进行盐酸-镁粉反应时，可观察加盐酸后升起的泡沫颜色，如果泡沫是红色则为正反应 2. 与金属盐的配位反应 （二）薄层色谱法 硅胶 弱极性药物 聚酰胺 含游离羟基黄酮及其苷 纤维素 多糖苷类混合物 1. 硅胶薄层色谱 2. 聚酰胺薄层色谱 影响聚酰胺吸附力的因素 1. 样品分子中酚羟基越多，吸附力↑ 2. 样品的共轭双键越多，吸附力↑ 3. 样品能形成分子内氢键，吸附力↓ 四、含量测定 （一）总黄酮含量测定 2. HPLC法 正相色谱 固定相 硅胶（键合极性基团） 流动相 正丁醇-乙酸-水 适用于 无羟基或乙酰化黄酮类 键合相 氰基（-CN）展开剂 乙烷-氯仿适用于 含一个羟基或乙酰化黄酮类 键合相 氨基（-NH2） 展开剂 二氧六环-二氯甲烷 适用于 含二个以上羟基黄酮类 反相色谱 键合相 C18键合相 展开剂 甲醇-水-乙酸、乙腈-水 检测器 紫外或荧光检测器 Ⅰ带 低强峰或带Ⅱ的肩峰 Ⅱ带 245 ~ 270 1. 盐酸-镁粉反应 还原反应 例 牛黄解毒片【鉴别】 取本品6片，研细，加乙醇10mL，温热 10分钟，滤过，取滤液5mL，加盐酸0.5mL 与少量镁粉，加热，溶液显红色。（黄芩） 例 清喉咽合剂 【鉴别】（1）取本品5mL，加醋酸乙酯5mL，振摇提取，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加镁粉少量及盐酸3~4滴，即显红色。（黄芩苷） 黄芩、连翘、地黄、麦冬、玄参 例 大山楂丸中山楂的鉴别 【鉴别】（2）取本品9g，切碎，加乙醇40 mL，置水浴上加热回流10分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加水10mL，加热使溶解，加正丁醇15 mL振摇提取，分取正丁醇提取液，蒸干，残渣 加甲醇5mL使溶解，滤过，取滤液1mL，加少 量镁粉与盐酸2~3滴，加热4~5分钟后，即显橙 红色。（黄酮类-槲皮素，金丝桃苷） 山楂、六神曲、麦芽 常用下列试剂的醇溶液 硝酸铝 三氯化铝 二氯氧锆 C3-OH、C4=O，C5-OH、C4=O,邻二-OH可与金属离子络合显色 Al3+、Zr4+能与大多数黄酮类药物产生黄绿色荧光 例 银黄口服液 【鉴别】（1）取本品1mL，加5%硝酸钠溶液和10%硝酸铝溶液各0.3mL，生成黄色沉淀；再加5%氢氧化钠溶液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显棕红色。（黄酮类） （2）取本品0.1mL，加水10mL，摇匀，取溶液2mL，加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液显黄色，再加盐酸1~2滴，黄色不褪。（黄酮类） 金银花、黄芩 表示B环无邻二-OH 常用吸附剂 在硅胶薄层板上，黄酮类化合物Rf值大小与其极性有关 在硅胶板上黄酮类Rf 值的比较 ＞ ＞ ＞ ＞ 样品极性大 Rf 小 展开剂极性要大 样品极性小 Rf大 展开剂极性要小 样品极性越大，越易被硅胶吸附 含羟基越多，越容易产生拖尾现象 措施 *铺板时加碱液 *展开剂加酸、水 *改用聚酰胺TLC法 例 二陈丸中橙皮苷的鉴别 100:17:13(3cm) 20:10:1:1(8cm) 制备 NaOH 黄酮类分子中的酚羟基与聚酰胺 分子中的酰胺基形成氢键 因酚羟基的数目、位置的不同使 形成氢键的能力有差异而得到分离 聚酰胺 属于氢键吸附 水＞有机＞碱液 展开剂极性应增强 4. 溶剂极性大，吸附力↓ 例 益心酮片中总黄酮鉴别 （山楂叶提取物） 乙醇-丙酮-水(7:5:6) 显色 例 双黄连颗粒中黄酮的鉴别 （金银花、黄芩、连翘） 醋酸 1. UV法 Ⅰ带 300 ~ 400 Ⅱ带 200 ~ 300 芦丁 (芸香苷) -芸香糖基 例 复方芦丁片中芦丁的含量测定——UV法 （芦丁、维生素C）